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小鼠ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)
閱讀:118 發(fā)布時(shí)間:2017-11-15提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 80.5KB |
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小鼠ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)
的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。
1. 標(biāo)本的采取和保存
大部分ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。一般說(shuō)來(lái),在5 天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過(guò)一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽(yáng)性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA 方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)
1-2 小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會(huì)造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會(huì)偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。
4.洗滌
洗滌在ELISA 過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)??梢哉f(shuō)在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
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