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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)操作留意事項(xiàng)

閱讀:109          發(fā)布時(shí)間:2016-7-21

  對(duì)于ELISA試劑盒的每一步都要留意才行。 ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn) (1)用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙,字越多越好,比方報(bào)紙,墊在下面,這么,加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小,沒(méi)加的字正常,十分簡(jiǎn)單差異。 (2)能夠利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以差異 (3)在標(biāo)本加完后,再把加樣槍全壓下,使液面產(chǎn)生小氣泡,也能夠加以差異 3、棋盤(pán)實(shí)驗(yàn)的操作方法: (1)將抗原按必定的梯度倍比稀釋后,按照ELISA從上到下(或許從左到右)的順序包被。 (2)將抗體按必定的梯度倍比稀釋后按照ELISA試劑盒從左到右或許從上到下參加。 (3)二抗的稀釋倍數(shù)是必定的,然后顯色,讀值。 OD值的測(cè)守時(shí),波長(zhǎng)要依據(jù)顯色劑的不一樣而定,通常上我們都運(yùn)用TMB顯色,450nm讀值。依據(jù)讀值得成果能夠選定適宜的抗原和抗體效價(jià),這即是棋盤(pán) 實(shí)驗(yàn)的意圖,假如抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話(huà)就用一抗和二抗作棋盤(pán)實(shí)驗(yàn)。
留意事項(xiàng)

1.ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保留。

2.濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響成果。

3.各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并常常校正其準(zhǔn)確性,以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)刻*控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,引薦運(yùn)用排槍加樣。

4.請(qǐng)每次測(cè)定的一起做規(guī)范曲線(xiàn),*做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于規(guī)范品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,核算時(shí)請(qǐng)zui終乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性運(yùn)用,ELISA試劑盒以避免穿插污染。

6.底物請(qǐng)避光保留。

C8orf30A    8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框30a抗體
CYP11A1    細(xì)胞色素P450 11A1抗體
CPT1A    肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1A抗體
CDC42    細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體
Phospho-CDC42 (Ser71)    磷酸化細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體
CAP2    環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體
CD15    階段特異性胚胎表面抗原-1抗體
C20orf202    20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框202抗體
CCL28    粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體

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