詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 脂肪炎癥因子Apelin抗體 |
英文名稱 | Apelin |
規(guī)格 | 0.1ml |
?
抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
E64d,蛋白酶抑制劑,阿洛司他丁 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥97%
2’脫氧胞苷5‘二鈉鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥97%
dAMP;2’脫氧腺苷5‘單 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>99%,BR純度:≥97%
黃素腺嘌呤二核苷二鈉鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:BR,羅氏進分純度:≥98%
GTP;鳥苷5‘三鈉鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>90%,分子生物學級純度:≥98%
肌苷5’二鈉鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥95%
尿苷5’二鈉鹽(UDP) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:98%
5’尿苷二鈉(UMP) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>99%,BR純度:≥95%
dAMPNa2;脫氧腺苷二鈉 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98,BR純度:95%
ATP.Na2; 腺苷5’三二鈉鹽水合物 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng),三水合物純度:95%
阿帕替尼鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,VEGFR2選擇性抑制劑純度:≥98%
cAMP;環(huán)腺苷,環(huán)腺苷,環(huán)腺苷 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,BR純度:≥97%
環(huán)腺苷,環(huán)腺苷(標準品) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>98%,標準品純度:≥97%
5'胞苷(CMP) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>95%,BR純度:≥97%
5酰水楊 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>97%純度:≥97%
D核糖5二鈉鹽 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:>85%,美國進口純度:≥98%
WAPL EBV核蛋白2一抗 * 0.2ml Sodium phosphate, dibasic, heptahydrate
CAPD3/hCAPD3 濃縮素2復合亞基D3一抗 * 0.2ml dATP 100 mM solution
AMSH 信號轉(zhuǎn)導銜接結(jié)合蛋白一抗 * 0.2ml Sodium decaate
ASB3 錨蛋白重復序列細胞因子信號抑制物盒蛋白家族3一抗 * 0.2ml Agarose
EIF2C1/Ago1 真核翻譯起始因子2C1一抗 * 0.2ml Agarose
Anillin 胞環(huán)蛋白肌動蛋白結(jié)合蛋白一抗 * 0.2ml Phytohemagglutinin
BIN3 細胞骨架銜接蛋白BIN3一抗 * 0.2ml Kinetin,6Furfurylamipurine
CCDC11 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11一抗 * 0.2ml EGTA, egtazic acid
脂肪炎癥因子Apelin抗體小鼠膽囊上皮細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺成纖維細胞,MPF細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺大動脈平滑肌細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺大動脈外膜成纖維細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺巨噬細胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶