物質(zhì)名稱

• 英文名稱：DyLight 594 Maleimide Phalloidin（DyLight 594 MAL 鬼筆環(huán)肽）

• 中文名稱：DyLight 594 馬來酰亞胺標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

制備步驟

1. 鬼筆環(huán)肽的純化

鬼筆環(huán)肽的制備起始于天然毒素的提取。毒蕈（如鵝膏菌）中提取的粗毒素通過色譜技術(shù)（如離子交換色譜和凝膠過濾色譜）分離純化，獲得高純度的鬼筆環(huán)肽。純化后的鬼筆環(huán)肽需通過高效液相色譜（HPLC）驗(yàn)證其純度，確保后續(xù)修飾的可靠性。

2. DyLight 594馬來酰亞胺染料的合成

DyLight 594是一種近紅外熒光染料，其馬來酰亞胺衍生物（DyLight 594 MAL）通過化學(xué)合成制備。以DyLight 594羧酸衍生物為起始原料，與馬來酰亞胺活性試劑（如N-羥基琥珀酰亞胺馬來酰亞胺）在縮合劑（如EDC或DCC）作用下反應(yīng)，生成DyLight 594馬來酰亞胺染料。產(chǎn)物需通過薄層色譜（TLC）和質(zhì)譜（MS）確認(rèn)結(jié)構(gòu)。

3. 鬼筆環(huán)肽的馬來酰亞胺修飾位點(diǎn)選擇

鬼筆環(huán)肽分子中含有游離的巰基（-SH），通常位于半胱氨酸殘基上。為避免破壞其與F-肌動(dòng)蛋白的結(jié)合能力，修飾反應(yīng)需控制馬來酰亞胺染料的摩爾比（通常為1:1至1:3），以確保僅有一個(gè)巰基被標(biāo)記。

4. 化學(xué)偶聯(lián)反應(yīng)

將純化的鬼筆環(huán)肽溶解于緩沖液（如磷酸鹽緩沖液，pH 7.4），加入DyLight 594 MAL染料，在惰性氣體（如氮?dú)猓┍Ｗo(hù)下室溫反應(yīng)4-12小時(shí)。反應(yīng)體系中可加入抗氧化劑（如DTT）以減少巰基氧化副反應(yīng)。

5. 產(chǎn)物純化與鑒定

反應(yīng)完成后，通過凝膠過濾色譜或HPLC去除未反應(yīng)的染料和副產(chǎn)物。純化后的DyLight 594 MAL 鬼筆環(huán)肽通過紫外-可見光譜（UV-Vis）和熒光光譜驗(yàn)證其吸收峰（DyLight 594特征峰約594 nm）和熒光特性。

6. 濃度標(biāo)定與儲存

產(chǎn)物通過氨基酸分析或紫外吸收法（ε=約150,000 M?1cm?1）測定濃度，最終分裝于緩沖液（含0.1% BSA或疊氮鈉作為穩(wěn)定劑）中，避光保存于-20℃。

特性與注意事項(xiàng)

• 熒光特性：DyLight 594 MAL 鬼筆環(huán)肽在激發(fā)光594 nm下發(fā)射紅色熒光，適用于共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)。

• 穩(wěn)定性：標(biāo)記后的鬼筆環(huán)肽對F-肌動(dòng)蛋白的結(jié)合親和力與天然鬼筆環(huán)肽相近，但需避光以防止染料光漂白。

• 應(yīng)用限制：僅限體外實(shí)驗(yàn)使用，不可用于活體成像（因馬來酰亞胺基團(tuán)可能引發(fā)非特異性反應(yīng)）。

產(chǎn)地：西安瑞禧生物

用途：科研

我們提供涵蓋peg多肽、ATTO、Alexa Fluor（AF染料）、AZDye、DyLight、Texas Red 以及 CF 系列染料。它們波長跨度大，從可見光波段延伸至近紅外區(qū)域，為實(shí)驗(yàn)提供了豐富的選擇。其標(biāo)記方式多樣靈活，且擁有出色的穩(wěn)定性，在熒光成像、流式細(xì)胞術(shù)、免疫分析等實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色，是科研探索的有力工具助力實(shí)驗(yàn)精準(zhǔn)高效開展。歡迎咨詢yff

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