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細菌轉(zhuǎn)化實驗
點擊次數(shù)：1700 發(fā)布時間：2017-7-24
1．以pGLO質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌為例，學(xué)習(xí)轉(zhuǎn)化的基本原理及方法。
2．驗證DNA是遺傳物質(zhì)，加深對中心法則的理解。
二．實驗原理
轉(zhuǎn)化（transformation）是指一段同源或異源的DNA轉(zhuǎn)入受體細胞并得到表達的水平基因的轉(zhuǎn)移過程，是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究和基因工程*的重要技術(shù)。目前常用的轉(zhuǎn)化方法有CaCl2法(化學(xué)轉(zhuǎn)化法)和電轉(zhuǎn)化法。本實驗是用pGLO細菌轉(zhuǎn)化試劑盒中提供的pGLO質(zhì)粒來轉(zhuǎn)化大腸桿菌，所用方法為CaCl2轉(zhuǎn)化法。
pGLO質(zhì)粒： 
接種環(huán)、移液器等
四．實驗步驟
1. 準(zhǔn)備平板： 每組：1塊LB平板，2塊LB/amp平板，1塊LB/amp/ara平板
2. 準(zhǔn)備感受態(tài)細胞：用250µl無菌水或轉(zhuǎn)化液懸浮試劑盒中提供的大腸桿菌菌粉，此即感受態(tài)細胞。
3. 活化受體細胞：挑取1環(huán)E.coli K12 HB101菌液，于LB培養(yǎng)基上37℃活化16-24h。
4. 轉(zhuǎn)化：
1）在兩只無菌離心管上分別標(biāo)
記+DNA, -DNA。
2）在上述兩管中分別加入
250µl轉(zhuǎn)化液。
3) 迅速置于冰上。
4）各挑取活化好的受體菌的一
個單菌落，懸浮于兩管轉(zhuǎn)化液中。
5）在標(biāo)有+DNA的管中加入一
環(huán)質(zhì)粒DNA，而標(biāo)有-DNA的管中不加。
6）將上述兩管于冰上放置10min。
7）在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基底部如左圖。