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技術(shù)文章
小鼠單抗Ig類/亞類鑒定用ELISA試劑盒使用說明書
點擊次數(shù)：1237 發(fā)布時間：2013-3-15
您好！感謝您選擇了我們的產(chǎn)品，請您在讀完此說明書后再開始您的實驗，這對您順利完成實驗很有幫助。
一、試劑原理：本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應(yīng)，zui后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本試劑盒具有*的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。
二、組成成分：
| 酶標板 含自封袋2個 | 2ⅹ96孔 | 標本稀釋液 | 15ml |
| 通用陽性對照 | 1ml | 顯色劑A | 15ml |
| 通用陰性對照 | 1ml | 顯色劑B | 15ml |
| 酶標二抗 6種 | 6×4ml | 反應(yīng)終止液 | 15ml |
| 20×清洗液 | 60mL | 加樣圖 | 2份 |
| 封板膜 | 4張 | 說明書 | 1份 |
三、使用范圍：用于雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。
四、使用方法：
1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。
2、取出酶標板。每個標本需要6孔，陽性對照6孔，陰性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。
3、將細胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）50μl加入酶標微孔板，每個標本加6孔，陽性對照和陰性對照也是各加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
4、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl，通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20-30分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍的那個孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類（陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.12，陽性判定標準：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算）。
五、產(chǎn)品特點：高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。（您如果覺得很多試劑自己可以準備想省一筆費用，那您可以登陸網(wǎng)
站選擇我們?yōu)槟鷾蕚涞暮喲b抗體鑒定產(chǎn)品C030215。當(dāng)然您也可以下次把標本交給我們來做這樣并且不會增加太多費
用。）
六、保存條件：不開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。
七、注意事項：
1、雖然本試劑盒過期后很久還有使用價值但還是請您在有效期內(nèi)使用。
2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結(jié)果。
3、手洗板子時一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，zui后要拍干凈。特別是在酶標二抗溫育后洗板時一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個在手工洗板時對結(jié)果很重要。
4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。
5、拿放板子時不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯誤結(jié)果。
6、本試劑一般不會出現(xiàn)兩個陽性，但出現(xiàn)兩個陽性的現(xiàn)象不論在進口或國產(chǎn)試劑中都是真實存在的，一般會一個OD很高,另一個很低但卻還能判為陽性，實驗分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準，出現(xiàn)這種情況有多重原因：1、培養(yǎng)的細胞中有“飼養(yǎng)細胞”殘留，2、抗體本身存在變異，3、融合的淋巴細胞取自不純的BALB/C，4、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，5、上清出現(xiàn)少量污染，6、實驗操作粗放，7、加錯試劑。
7、陽性對照數(shù)據(jù)并不*一樣，僅作為有效指示。
特別提示：不具備ELISA基礎(chǔ)知識和操作的人員不要完成此實驗或類似實驗，因為這可能會給您帶來錯誤的
結(jié)果和不必要的損失，實驗中有疑問請CAB技術(shù)咨詢?？头蛑苯又码?