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技術(shù)文章

小鼠單抗Ig類/亞類鑒定用ELISA試劑盒使用說明書

點擊次數(shù):1237 發(fā)布時間:2013-3-15

您好!感謝您選擇了我們的產(chǎn)品,請您在讀完此說明書后再開始您的實驗,這對您順利完成實驗很有幫助。
一、試劑原理:本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類(可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板,與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合,再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應(yīng),zui后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止,再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本試劑盒具有*的分辨率,是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。
二、組成成分:

  

酶標板     含自封袋2個
2ⅹ96孔
 標本稀釋液
15ml
通用陽性對照    
1ml
顯色劑A
15ml
通用陰性對照       
1ml
顯色劑B
15ml
酶標二抗         6種
6×4ml
反應(yīng)終止液
15ml
 20×清洗液
60mL
加樣圖
2份
 封板膜
4張
說明書
1份

 
三、使用范圍:用于雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。
四、使用方法:
1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫(大約30分),然后用純水把清洗液配成工作濃度(一份濃縮清洗液加19份純水)。
2、取出酶標板。每個標本需要6孔,陽性對照6孔,陰性對照6孔。多余的用自封袋保存,記得放入干燥劑。
3、將細胞培養(yǎng)上清(或特異親和純化的抗體)50μl加入酶標微孔板,每個標本加6孔,陽性對照和陰性對照也是各加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
4棄去板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl,通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30-40分鐘。
5、吸棄板內(nèi)液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl,換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20-30分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果,看顯色藍的那個孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液(每孔50μl)終止反應(yīng)后用酶標儀450nm測定波長,630nm參考波長雙波長測定結(jié)果,參看高值孔所對應(yīng)的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8,陰性對照一般不高于0.12,陽性判定標準:樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15,陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。
 
五、產(chǎn)品特點:高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。(您如果覺得很多試劑自己可以準備想省一筆費用,那您可以登陸網(wǎng)
        站選擇我們?yōu)槟鷾蕚涞暮喲b抗體鑒定產(chǎn)品C030215。當(dāng)然您也可以下次把標本交給我們來做這樣并且不會增加太多費
        用。)
六、保存條件:不開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。
 
七、注意事項:
1雖然本試劑盒過期后很久還有使用價值但還是請您在有效期內(nèi)使用。
2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬,雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜,有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結(jié)果。
3、手洗板子時一定要把孔加滿,停留10秒然后棄盡,zui后要拍干凈。特別是在酶標二抗溫育后洗板時一定要把酶吸出而不是甩出,要吸凈。這個在手工洗板時對結(jié)果很重要。
4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好,隨盒存放。
5拿放板子時不要劇烈抖動,以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯誤結(jié)果。
6、本試劑一般不會出現(xiàn)兩個陽性,但出現(xiàn)兩個陽性的現(xiàn)象不論在進口或國產(chǎn)試劑中都是真實存在的,一般會一個OD很高,另一個很低但卻還能判為陽性,實驗分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準,出現(xiàn)這種情況有多重原因:1、培養(yǎng)的細胞中有“飼養(yǎng)細胞”殘留,2、抗體本身存在變異,3、融合的淋巴細胞取自不純的BALB/C,4、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水,5、上清出現(xiàn)少量污染,6、實驗操作粗放,7、加錯試劑。
7、陽性對照數(shù)據(jù)并不*一樣,僅作為有效指示。
 
      特別提示:不具備ELISA基礎(chǔ)知識和操作的人員不要完成此實驗或類似實驗,因為這可能會給您帶來錯誤的
      結(jié)果和不必要的損失,實驗中有疑問請CAB技術(shù)咨詢??头蛑苯又码?

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