細(xì)胞和組織DNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織開發(fā)的專用裂解液DC，在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提取和純化。使用高效硅基DNA純化柱，高效結(jié)合基因組DNA，從而獲得純度高，產(chǎn)量高的基因組DNA。提取的基因組DNA完整性高，適合PCR、qPCR、酶切、Southern雜交、文庫(kù)構(gòu)建、克隆等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液DCW2中加入48mL無水乙醇，并標(biāo)記“√"和時(shí)間，避免重復(fù)加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、無DNase和無RNase離心管、RNaseA（10mg/mL，或貨號(hào)QR0101）

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取DNA

1.1.1 取20-100mg樣本放入液氮中充分研磨，加入700μL裂解液DC，充分混勻，室溫作用1分鐘。

或取20-100mg樣本加入700μL裂解液DC，加入1顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2分鐘。

備注：不同樣本中RNA含量差異很大，過多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞，最終導(dǎo)致RNA提取量下降。1.1.2 55℃孵育1分鐘。

1.1.3 12,000rpm離心1分鐘。取500μL上清。

1.1.4 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10分鐘。

1.1.5 加入250μL無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取DNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液DC。輕輕吹打混勻，55℃孵育1分鐘。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.2.5（選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10分鐘。

1.2.6 加入0.5倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取DNA

1.3.1 yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻，55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.3.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.3.5 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10分鐘。

1.3.6 加入0.5倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

2. DNA純化

2.1 全部轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2 向DNA純化柱中加入500μL洗滌液DCW1，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.3 向DNA純化柱中加入500μL洗滌液DCW2，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將DNA純化柱放入新無DNase和無RNase離心管，加入30-50μL 洗脫液C，室溫放置1分鐘。

2.7 12,000rpm離心2分鐘，得到DNA溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 經(jīng)常更換手套，防止DNA污染。

2. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止DNA降解。

3. 常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 動(dòng)作輕柔，防止基因組DNA斷裂。

5. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液C置于65℃水浴后再使用。