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詳細(xì)介紹
| 存儲(chǔ)條件： | 2~8℃暗處保存。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 檢驗(yàn)原理： | 生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG聚合物與結(jié)合在組織片上的一抗反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素與生物素免疫復(fù)合物結(jié)合進(jìn)一步形成聚合物，聚合物上的辣根酶（HRP）催化顯色底物（DAB或AEC）形成不溶性色原，從而在顯微鏡下顯示出組織片中的特定抗原的位點(diǎn)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 試劑盒內(nèi)容： |
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| 檢驗(yàn)方法： | 1、檢驗(yàn)所需儀器、設(shè)備：移液器、恒溫箱、修復(fù)儀、免疫組化筆、計(jì)時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶。 2、試劑準(zhǔn)備：DAB顯色液需要在使用前配制。 3、操作程序： a) 脫蠟和水化 石蠟切片置于新鮮二甲苯中，浸泡10分鐘×3次；去除多余的液體后，置于無(wú)水乙醇中，浸泡3分鐘×3次；去除多余的液體后，置于95%乙醇中，浸泡3分鐘×2次；去除多余的液體后，置于75%乙醇中，浸泡3分鐘×2次；蒸餾水沖洗1分鐘，置于PBS緩沖液中。 b) 抗原修復(fù)，參見(jiàn)一抗說(shuō)明書(shū)。 c) 阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶 加入適量的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫孵育10分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 d) 滴加封閉用正常山羊血清工作液 滴加100μL或適量的封閉用正常山羊血清工作液，室溫孵育10~15分鐘，傾去血清，勿洗。 e) 滴加一抗 根據(jù)組織大小，滴加100μL或適量的一抗，37℃孵育60分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 f) 滴加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物 滴加100μL或適量的生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物，室溫孵育10~15分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 g) 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液 滴加100μL或適量的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育10~15分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 h) 顯色 加入適量新鮮配制的DAB或AEC顯色液，室溫孵育5～8分鐘。 i) 復(fù)染 自來(lái)水沖洗，蘇木素染色液孵育20秒；分化、沖洗返藍(lán)。 j) 脫水、透明、封片 k) 閱片。 4、結(jié)果判定，染色結(jié)果須由有資質(zhì)的病理醫(yī)生對(duì)染色后的組織片在光學(xué)顯微鏡下觀察并進(jìn)行判讀。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋?zhuān)?/span> | 1、抗原修復(fù)、孵育時(shí)間、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯(cuò)誤結(jié)果。 2、在每一次染色過(guò)程中，必須有空白對(duì)照和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。 3、如果陽(yáng)性組織對(duì)照不能顯示適當(dāng)?shù)年?yáng)性染色，應(yīng)判定該批次樣本的檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。 4、若生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物和辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液孵育溫度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能導(dǎo)致染色過(guò)強(qiáng)及背景染色。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 檢驗(yàn)方法的局限性： | 1、免疫組織化學(xué)染色是一種需通過(guò)多個(gè)操作步驟完成的檢測(cè)過(guò)程。在組織前期處理和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的不規(guī)范操作，有可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 2、專(zhuān)業(yè)的操作人員、經(jīng)過(guò)認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室和標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程，可以減少各種外界因素造成的操作偏差。 3、紅細(xì)胞和細(xì)胞色素 C可能會(huì)造成假陽(yáng)性結(jié)果。 4、某些組織中內(nèi)源性生物素含量比較高，可能導(dǎo)致染色過(guò)強(qiáng)及背景染色。 5、陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無(wú)該抗原存在。待測(cè)抗原編碼基因變異、抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)龋紩?huì)造成抗原無(wú)法檢出。 6、本試劑僅對(duì)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進(jìn)行了驗(yàn)證，不作其他用途。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 產(chǎn)品性能指標(biāo)： | 1、裝量：試劑盒各組份的溶液裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。 2、符合性：取符合性組織片（包括陽(yáng)性組織對(duì)照和陰性組織對(duì)照），經(jīng)相應(yīng)的免疫組化實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)陽(yáng)性著色定位準(zhǔn)確，且無(wú)背景染色；同時(shí)，空白對(duì)照和陰性對(duì)照染色結(jié)果為陰性。 3、批內(nèi)重復(fù)性：取同一批次的試劑盒，檢測(cè)組織片3片，染色強(qiáng)度和定位無(wú)明顯差異。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 標(biāo)本染色： | 1. 石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。 2. 如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進(jìn)行。 3. 3% H2O2去離子水（無(wú)色液體）孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。PBS沖洗，3分鐘 3次。 4. 滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育10~15分鐘，傾去，勿洗。 5. 滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜。 6. PBS沖洗，3分鐘 3次。 7. 滴加試劑B（黃色液體）室溫或37℃孵育10~15分鐘。 8. PBS沖洗，3分鐘 3次。 9. 滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育10~15分鐘。 10. PBS沖洗，3分鐘 3次。 11. 顯色劑顯色（DAB或AEC）。 12. 自來(lái)水充分沖洗。 13. 如果需要，可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。 14. 選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span> |
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