細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá)，催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物細(xì)胞或活體內(nèi)（in vivo）檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感，堪稱上同類產(chǎn)品佳。

  

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）	毫升
固定液（Reagent B）	毫升
酸性液（Reagent C）	毫升
稀釋液（Reagent D）	毫升
染色液（Reagent E）	毫升
說明書	1份

 

保存方式

 

保存 染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里； 稀釋液（Reagent D）和 染色液（Reagent E）用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

2毫升離心管：用于配制染色工作液

15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液

恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的細(xì)胞

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

操作一、25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液（Reagent D）到2毫升離心管，加入xx微升 染色液（Reagent E），混勻后，放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作：

 

• 小心抽去25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx毫升 清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面
• 小心抽去清理液
• 小心加入xx毫升 固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去固定液
• 小心加入xx毫升 酸性液（Reagent C），清洗細(xì)胞表面
• 小心抽去酸性液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8一次
• 小心加入xx毫升 染色工作液，覆蓋整個細(xì)胞表面
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。

 

操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，加入xx微升 染色液（Reagent E），混勻后，放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。

 

1．小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液

4．每孔加入xx微升 固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育5分鐘

6．小心抽去固定液

7．每孔加入xx微升 酸性液（Reagent C），清洗細(xì)胞表面

8．小心抽去酸性液

9．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8一次

10．每孔加入xx微升 染色工作液，覆蓋整個細(xì)胞表面

11．放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色（注意：避免液體蒸發(fā)）

12．在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為100次（4個24孔板）或20次（20個25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶）操作
• 操作時，須戴手套
• 本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到優(yōu)化
• 使用時，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實(shí)驗(yàn)效果
•  染色工作液避免光照
• 細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強(qiáng)，孵育3小時即顯示陽性；細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時
• 細(xì)胞染色長孵育時間為24小時
• 孵育時避免液體蒸發(fā)
• 本產(chǎn)品染色敏感，甚至對于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰；用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處
• 細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方
• 染色后的細(xì)胞樣品可以在4℃冰箱里長期保存，同樣須避免光照
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：

操作容器	建議處理液規(guī)格
載玻片	100微升
載玻片培養(yǎng)皿	1毫升
35mm培養(yǎng)皿	1毫升
96孔培養(yǎng)板	100微升
48孔培養(yǎng)板	200微升
24孔培養(yǎng)板	500微升
12孔培養(yǎng)板	1毫升
6孔培養(yǎng)板	2毫升
25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶	3毫升

 

• 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色敏感