冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途
冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子原位染色試劑是一種旨在通過(guò)硝基藍(lán)四氮唑染料，受到超氧陰離子O2-的還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑色色素沉淀，來(lái)定性檢測(cè)冰凍切片組織細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的生成和增加的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的?？梢员挥糜诩?xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O2-的直接還原，便產(chǎn)生不溶性甲暨色素。據(jù)此證明組織細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子活性氧族的存在。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于組織細(xì)胞染色孵育
光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
1． 準(zhǔn)備5片待測(cè)的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
2． 置于室溫下，小心加上x(chóng)x微升預(yù)冷的清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面
3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 1
4． 小心加上x(chóng)x微升室溫預(yù)熱的染色液（Reagent B），鋪滿整個(gè)切片表面
5． 在37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱里，孵育60分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
6． 小心移去切片上的染色液（Reagent B），避免光照
7． 小心加上x(chóng)x微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片表面
8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
9． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8二次
10．放上蓋玻片或封片
11．即刻置于光學(xué)顯微鏡下觀察：組織細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)黑色，顯示超氧陰離子濃度增強(qiáng)
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片
3． 操作時(shí)，須戴手套
4． 孵育時(shí)，須避免光照
5． 組織染色前后的清洗過(guò)程中，小心操作，以免將組織沖洗掉
6． 如果超氧陰離子活性氧濃度過(guò)低，可以延長(zhǎng)孵育時(shí)間至4小時(shí)
7． 建議切片染色完成后，即刻進(jìn)行組織細(xì)胞觀察分析
8． 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰