1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。