細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

 

主要用途

 

細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)一氧化碳處理產(chǎn)生的結(jié)合色素還原后，產(chǎn)生差異比色峰值的變化，來(lái)測(cè)定樣品中酶系濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體、植物等）、純化微粒體樣品以及體液樣品（血清和血漿等）細(xì)胞色素P450酶系的總濃度檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱，共有15000多種亞酶，其中動(dòng)物和人體4778種、植物5769種、真菌3045種、細(xì)菌1200種等。作用在于體內(nèi)外源化合物（xenobiotics），包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝，即單加氧化作用（monooxygenation）和羥化作用（hydroxylation）。細(xì)胞色素P450酶是微粒體中一氧化碳結(jié)合色素，在450nm波長(zhǎng)產(chǎn)生峰值。 

           

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液（Reagent A） 50毫升

還原液（Reagent B） 5管

稀釋液（Reagent C） 5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書   1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

一氧化碳：用于結(jié)合樣品色素

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，移出1毫升稀釋液（Reagent C）到還原液（Reagent B）管里，混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，置于冰槽里備用。

 

1．準(zhǔn)備好待測(cè)樣品（例如細(xì)胞或組織裂解萃取液或微粒體樣品等），置于冰槽里

2．設(shè)定好分光光度儀（溫度為25℃）：波長(zhǎng)450nm和490nm，并置零 

3．移取2毫克待測(cè)樣品到1.5毫升離心管

4．加入適量的緩沖液（Reagent A）到總?cè)萘繛?00微升，混勻

5．插入一氧化碳管于液體中，氣泡20秒（注意：使用微量一氧化碳，避免管內(nèi)液體溢出）

6．加入100微升還原工作液，混勻

7．移入到1毫升比色皿

8．即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，獲得吸光讀數(shù)

9．實(shí)際吸光讀數(shù)：OD450－OD490 

10．計(jì)算樣品濃度：

 

[實(shí)際吸光讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 1.0（體系容量；毫升]÷[0.9（樣品容量；毫升）X 91（毫摩爾吸光系數(shù)）]＝微摩爾/毫升÷（樣品重量）毫克/毫升＝微摩爾/毫克