冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

冰凍切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化脂溶性偶氮染料蘇丹黑B技術(shù)，分析組織樣品中早期脂褐素沉積現(xiàn)象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到黑色表達的組織細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老組織細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于人體或動物組織冰凍切片的的早期脂褐素檢測。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。  

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）"色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細(xì)胞衰老中后期的獨立指征。蘇丹黑B（SUDAN BLACK B），又稱為二氫二基偶氮萘偶氮嵌間二氮雜苯（2,3-dihydro-2,2-dimethyl-6-（4-phynylazo）-1-naphthyl）azo）1H-perimidine），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。脂褐素分為早期和晚期，早期脂褐素的脂質(zhì)特性與脂溶性蘇丹黑B染料發(fā)生反應(yīng)，顯示黑色。同時使紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色。

  

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）              毫升

固著液（Reagent B）          毫升

染色液（Reagent C）          毫升

澄清液（Reagent D）          毫升

產(chǎn)品說明書               1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent C）和澄清液（Reagent D）避免光照，瓶蓋密閉；有效保證6月

 

用戶自備

 

小型染色缸：用于切片組織細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞

 

 

實驗步驟

 

1． 取出待測的10微米厚冰凍組織切片（注意：使用快速冷凍snap－frozen制片，避免包埋處理）  

2． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個樣品表面

3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升固著液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個樣品表面

5． 在室溫下孵育15分鐘

6． 小心移去切片上的固著液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面

8． 在室溫下孵育5分鐘

9． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

10． 小心將切片置入xx毫升染色液（Reagent C）的小型染色缸里（注意：確保切片浸泡在染色液（Reagent C））

11． 室溫下孵育16小時，避免光照，密閉瓶蓋

12． 取出切片，小心移去切片上的染色液（Reagent C）

13． 室溫下，小心將切片置入新的xx毫升澄清液（Reagent D）中5次（2秒/次）（注意：直至切片顏色呈現(xiàn)灰色）

14． 輕輕移去切片上的澄清液（Reagent D），或空氣中晾干 

15． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）

16． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

17． 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）

18． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂褐素陽性組織細(xì)胞呈現(xiàn)黑色，紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色，背景呈現(xiàn)不同程度灰色

 

注意事項

 

1． 本產(chǎn)品為50次操作

2． 操作時，須戴手套

3． 本產(chǎn)品不適合于含有紅細(xì)胞的樣本

4． 使用時，避免污染母液

5． 染色液（Reagent C）避免光照

6． 染色時，染色缸須密閉，至關(guān)重要

7． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

8． 染色后澄清不宜過度，否則容易褪色

9． 染色完成后，即刻進行光學(xué)顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 

 

使用承諾

 

公司秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。