檢測范圍：80μg/ L2400μg/ L 96determinations的

目的

此套件可用于測定CRP濃度Ratserum，cellculture物上清或其它相關(guān)生物液體

 

檢測原理

該試劑盒檢測樣本中RatCRP水平，用純化RatCRP抗體涂層微孔，使固相抗體，然后addCRP的井，CombinedCRP抗體，HRP標(biāo)記，成為抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后添加TMB底物溶液，在HRP酶催化TMB底物變成藍(lán)色，反應(yīng)終止通過加入的硫酸溶液和顏色的變化是用分光光度法在450nm波長下測量的。大鼠CRP的濃度的樣品中，然后由比較OD值樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試劑盒提供的材料

1

洗的解決方案

20ML×1瓶

7

STOPP解決方案

6毫升×1瓶

2

酶標(biāo)試劑

6毫升×1瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)（4800μg/ L）

0.5毫升×1瓶

3

Microelisa stripplate

12well×8strips

9

標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

1.5毫升×1瓶

4

樣品稀釋液

6毫升×1瓶

10

指令

1

5

顯色溶液A

6毫升×1瓶

11

封板膜

2

6

顯色液B

6毫升×1瓶

12

密封袋

1

標(biāo)本要求

1。 ，盡快標(biāo)本采集后，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)該是extractas實驗后盡快提取。如果它不能，標(biāo)本可以保存在-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

2。無法檢測的樣品含NaN3，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

分析過程

1。稀釋和添加樣品：稀釋原始密度標(biāo)準(zhǔn)如下表所示：

2400μg/ L的

5標(biāo)準(zhǔn)

150μL原始密度標(biāo)準(zhǔn)+150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

1200μg/ L的

4標(biāo)準(zhǔn)

150μL5標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

600μg/ L的

3標(biāo)準(zhǔn)

150μL4標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

300μg/ L的

2標(biāo)準(zhǔn)

150μL+150微升3標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

150微克/ L

1標(biāo)準(zhǔn)

150μL+150微升2標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑

2。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）。測試樣本。加樣品稀釋液40μl的測試樣品，然后加入待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍），加樣井，不觸及孔壁盡可能輕輕地混合。

3。溫育：閉板后封板膜，在37℃孵育30分鐘。

配液：將30倍（或20倍）洗滌溶液稀釋30倍（或20倍），用蒸餾水和預(yù)定。

5.washing：揭掉封板膜，干discardLiquid，擺動，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后排出，重復(fù)5次，拍干。

加酶，每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

溫育：操作3。

洗滌：操作5。

9。顏色：，每孔加入顯色溶液A的50ul的顯色溶液B，避光保存15分鐘，在37℃

反應(yīng)10.Stop的：加入終止液，每孔，停止反應(yīng)（黃色的藍(lán)色的顏色變化）。

11.assay：以空白零，讀加終止液后15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度。

步驟說明

標(biāo)準(zhǔn)，樣品稀釋液

 

AddStandard，樣品稀釋液，37℃孵育30分鐘。

 

洗5次，共軛AddHRP的試劑，在37℃孵育30分鐘。

 

洗5次，加入顯色解決方案A和B，孵育在37℃30分鐘。

 

AddStopp解決方案

 

15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度

 

計算

計算

以水平的標(biāo)準(zhǔn)密度，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線在坐標(biāo)紙上，找出相應(yīng)的密度，根據(jù)樣品的OD值由采樣曲線，再乘以稀釋倍數(shù)，或計算直線標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，與標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品的密度，乘以稀釋倍數(shù)，其結(jié)果是樣品的實際密度。

重要注意事項

1。該試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘，ELISA板涂如果還沒有使用后打開，板應(yīng)裝入密封袋中保存。

2。洗滌緩沖液可能會有結(jié)晶析出，可被加熱的水，可以在稀的情況下溶解。洗滌時不影響結(jié)果。

3。加樣品采樣的每一步，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。在5分鐘內(nèi)添加樣品，如果樣品的數(shù)量多，推薦使用排。

4。如果待測物質(zhì)含量過高（樣本OD是大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*），請稀釋樣品（n倍），請乘以稀釋倍數(shù)diluenteand。（×N×5）。

5。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6。基板避光保存。

7。請嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀作為標(biāo)準(zhǔn)。

8。所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9。不要混用試劑與從其他地段。

 

儲存與有效期

不要將2-8℃。

2.validity：半年