HL10014.5 v.A 真菌/酵母氧化酶活性測定試劑盒產(chǎn)品說明書 

主要用途 真菌/酵母氧化酶活性測定試劑是一種旨在通過氧化酶反應系統(tǒng)中還原性氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法測定樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種真菌或酵母株裂解懸液中氧化酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無 菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術背景 氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的線粒體上（包括真菌和酵母細胞），主要 通過氧化磷酸化為細胞提供能量。基于底物還原型（reduced cytochrome c），受到氧 化酶的催化，轉(zhuǎn)化為氧化型（oxidized cytochrome c），在分光光度儀下，出現(xiàn)吸光值的變化（550nm 波長），由此定量測定氧化酶的活性。氧化酶反應系統(tǒng)為：

Cytochrome c oxidase 4 cytochrome c2＋ + 8H+ + O2 → 4 cytochrome c3+ + 2H2O + 4H+ 還原型 氧化型 （高吸收峰） （低吸收峰）

注意事項 1． 本產(chǎn)品為 20 次操作，包括背景對照 2． 操作時，須戴手套 3． 樣品中忌用 DTT 和巰基乙醇等處理 4． 強化液（Reagent B）為固體狀，移取方法為：使用 1 毫升槍頭，將部分剪去；或使用 0.5 毫升 PCR 管的蓋子內(nèi)圈盛滿；或秤重 0.1 克 5． 建議測定細胞裂解懸液的蛋白濃度，便于計算活性單位之需；建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量檢測 試劑盒（30030.1） 6． 每增加 1 個樣品，增加反應工作液為：反應液（Reagent E）100 微升＋穩(wěn)定工作液 3 微升，以此類推。 配制反應工作液時，須根據(jù)樣本數(shù)量配制實際工作液容量 7． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需 1 次 8． 分光光度計波長嚴格設置在 550nm，誤差 10nm 將不產(chǎn)生信號 9． 加樣后 3 秒內(nèi)進行比色測定 10．比色測定后，比色皿須清洗* 11．比色皿背景空對照 0 秒讀數(shù)通常大于 0.2 為理想狀態(tài)；建議使用比色皿測定 12．背景空對照的正常讀數(shù)差值（0 秒－60 秒）通常為 0.001 至 0.005（正負即可） 13．樣品 0 秒讀數(shù)通常和背景空對照 0 秒讀數(shù)一致 14．樣本測定 60 秒讀數(shù)低于 0 秒讀數(shù)表明具有酶活性15．酶活性單位濃度定義：在 28℃室溫下，pH 7.0 的情況下，每單位酶在單位時間內(nèi)（每分鐘）氧化 1 微 摩爾的16．建議待測樣本總蛋白濃度為 50 微克/100 微升；如果樣本酶活性過低或過高，即 60 秒讀數(shù)不變或為零， 則可以增加或降低樣本量（本公司提供 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 30030.1） 17．本公司提供系列細胞色素相關試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標準 1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

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