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新一代螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)——更簡便、更靈敏、更精確
在傳統(tǒng)報告基因檢測系統(tǒng)中，大多數(shù)使用的是螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶閃光型(flash type)檢測體系，但其發(fā)光信號的半衰期較短，穩(wěn)定性不佳等缺點，會對實驗結(jié)果和使用造成影響。針對傳統(tǒng)閃光型螢光素的不足，翌圣生物經(jīng)過潛心研究開發(fā)出新一代的操作更便捷、半衰期更長、穩(wěn)定性更好的輝光型(glow type)螢光素酶檢測系統(tǒng)，適用于如哺乳動物細胞、原生質(zhì)體等樣本。
螢光素酶報告基因檢測檢測原理示意圖
以下是閃光型(flash type)與輝光型(glow type)對比情況：
閃光型(flash type)操作流程，較為繁瑣
輝光型(glow type)操作流程，一步完成檢測
Yeasen檢測系統(tǒng)螢光強度和穩(wěn)定性與P品牌相當(dāng)
Yeasen檢測系統(tǒng)和螢光素酶相互作用，螢光素發(fā)光淬滅效果與P品牌相當(dāng)
Yeasen檢測系統(tǒng)在常用培養(yǎng)基中正常發(fā)光，發(fā)光效果差異小于P品牌
A：室溫條件（20-22℃）。反應(yīng)組分如細胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等都需要調(diào)整到室溫，因為兩種螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響，為了保證實驗一致性，推薦反應(yīng)室溫調(diào)至室溫。
A：1）螢火蟲螢光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構(gòu)建的載體。
2）海腎螢光素酶建議選取pRL-TK或pGL-4載體或者自己構(gòu)建相應(yīng)的載體。建議優(yōu)先選用中等強度的啟動子（如TK），而不使用強啟動子（如SV40、CMV），以免影響主報告基因的表達，或進行實驗摸索選擇合適的載體。
A：推薦對照組螢火蟲和海腎螢光素酶的讀值接近，或者海腎螢光素酶比螢火蟲螢光素酶的讀值略高。實際實驗過程中，由于螢火蟲螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶的質(zhì)粒抽提的質(zhì)量不一致，待檢測目的調(diào)控元件的調(diào)控能力的不同等原因，我們推薦預(yù)實驗優(yōu)化螢火蟲螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染量。
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit輝光型螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11404ES60/80 | 100/1000 T |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11405ES60/80 | 100/1000 T |
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11401ES76/80 | 500/1000 T |
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11402ES60/80 | 100/1000 T |
pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc螢光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照 | 11556ES03 | 1 μg |
Luciferase Reporter Plasmid negative control 螢光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照 | 11555ES03 | 1 μg |
D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽 | 40902ES01/02 | 100/500 mg |
D-Luciferin, Sodium Salt D-熒光素鈉鹽 | 40901ES01/02 | 100/500 mg |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES03 | 1.0 mL |
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