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細胞遷移侵襲實驗中基質(zhì)膠的應用
基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白EHS小鼠腫瘤中提取出的可溶性基底膜制備物，其主要成分由層粘連蛋白，Ⅳ型膠原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等組成，還包含生長因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、組織纖溶酶原激活物和EHS腫瘤自身含有的其他生長因子。
在1980年代中期由丹麥的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分別發(fā)現(xiàn)并具體描述基質(zhì)膠【1】，其主要生產(chǎn)過程是用鹽水提取/洗滌腫瘤勻漿后可溶性蛋白質(zhì)，再用溶劑萃取產(chǎn)物中不溶性復合物，在低溫下使用緩沖液進行透析后獲得無色到淡黃色溶液。
表：基質(zhì)膠組分【1】
基質(zhì)膠為組織和細胞提供支撐、抗拉強度和支架支撐，也可以作為細胞粘附和運動的三維亞結構以及生長因子、趨化因子和細胞因子的儲存庫，同時可作為細胞形態(tài)發(fā)生和分化的信號等。
翌圣生物開發(fā)生產(chǎn)的CeturegelTM基質(zhì)膠不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒），超低內(nèi)毒素含量，并全部經(jīng)過支原體檢測保證無支原體污染，包括基本濃度、高濃度、低生長因子等不同類型基質(zhì)膠。
應用方向
產(chǎn)品特點
特點：
安全性高：不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒）
濃度多樣性：濃度范圍在8~20 mg/ml之間
批次穩(wěn)定性好：嚴格生產(chǎn)質(zhì)檢過程保證批次間性能穩(wěn)定
低內(nèi)毒素：內(nèi)毒素含量≤4 EU/ml
污染物檢測： 經(jīng)檢測無支原體和細菌、真菌殘留
單批產(chǎn)量高：單批產(chǎn)量在L級別以上
兼容性好：可與任何類型的細胞培養(yǎng)基兼容
遷移侵襲驗證
圖：遷移侵襲實驗過程
1 基質(zhì)膠鋪板
首先將拿到的CeturegelTM基質(zhì)膠凍融后按照原液1:8用無血清培養(yǎng)基稀釋（終濃度不要超過3mg/ml）來包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30min使CeturegelTM基質(zhì)膠聚合成凝膠，使用前進行基底膜水化。
2 制備細胞懸液
1將細胞饑餓12-24h以去除血清的影響（可選）。
2消化細胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液并用PBS洗1-2次，用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸調(diào)整細胞密度至4×104~2×105個/ml。
3 細胞接種
1取細胞懸液100μl加入Transwell小室。
2在24孔板下室加入600μl含20%FBS培養(yǎng)基，添加時要避免下層培養(yǎng)液和小室間產(chǎn)生氣泡，產(chǎn)生氣泡易使下層培養(yǎng)液的趨化作用減弱甚至消失。
3培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(時間主要依癌細胞侵襲能力而定)。
4 結果統(tǒng)計
1取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用不含鈣的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定30分鐘，將小室適當風干。
2然后使用0.1%結晶紫染色20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞，用PBS洗3遍于400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細胞，記數(shù)。
圖：細胞侵襲后經(jīng)結晶紫染色的結果
FAQ
Q1拿到的基質(zhì)有色差的變化（淡黃色到深紅色）是什么原因？
A對于含酚紅的基質(zhì)膠主要原因是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的，但是與5％CO2平衡后色差即會減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使基質(zhì)膠分散均勻。
Q2基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項？
A所有操作需在無菌環(huán)境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
Q3基質(zhì)膠的如何分裝凍存使用？
A可將凍融后的CeturegelTM基質(zhì)膠分裝在多個小管，所有分裝均需用預冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。所有涉及到使用的物品在使用前需預冷，使用預冷的移液管、吸頭及小管等操作基質(zhì)膠。
[1] Kleinman H K , Martin G R . Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.
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