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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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近年來(lái)，mRNA疫苗/藥物逐漸走入大眾的視野。mRNA疫苗/藥物具有設(shè)計(jì)快速、成本低和易于規(guī)?；a(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，但由于mRNA本身易降解，目前主要通過(guò)加帽加尾的方式提高mRNA制劑的穩(wěn)定性，并輔助mRNA的翻譯。近年來(lái)，研究者們?cè)诙喾N生物中發(fā)現(xiàn)了一種新型RNA——環(huán)狀RNA(circular RNA, circRNA)，此類RNA呈共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不易被核酸外切酶降解，較mRNA更加穩(wěn)定，且可以實(shí)現(xiàn)非帽依賴蛋白質(zhì)翻譯。因此circRNA的發(fā)現(xiàn)為開(kāi)發(fā)新一代生產(chǎn)工藝更簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性更好和時(shí)效更長(zhǎng)的RNA疫苗及藥物提供可能。
圖1 ：RNA疫苗作用過(guò)程[1]
circRNA生產(chǎn)過(guò)程包括：模板制備、體外轉(zhuǎn)錄、DNA模板去除、環(huán)化和純化。在RNA環(huán)化后需要用核糖核酸酶R (Ribonuclease R, RNase R)對(duì)未環(huán)化的RNA進(jìn)行消化，達(dá)到富集circRNA的目的。當(dāng)前主流使用的RNase R主要為進(jìn)口品牌，存在價(jià)格高、貨期久等問(wèn)題，不適合用于大批量生產(chǎn)。翌圣擁有雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái)和專門(mén)為GMP級(jí)別產(chǎn)品打造的分子酶生產(chǎn)基地，從硬件和軟件上同時(shí)保證產(chǎn)品的品質(zhì)。經(jīng)過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行理性設(shè)計(jì)和基于超高通量單細(xì)胞分選技術(shù)的定向進(jìn)化，翌圣研發(fā)團(tuán)隊(duì)成功開(kāi)發(fā)出一款純度高、消化活性強(qiáng)的RNase R產(chǎn)品，為新一代RNA疫苗/藥物上市提供助力！
翌圣生物RNase R（Cat#14606ES）是一種來(lái)源于大腸桿菌的Mg2+依賴性3'→5'核糖核酸外切酶，它能消化所有的線性RNA，不易消化circRNA、套索RNA或3’端突出末端少于7 個(gè)核苷酸的雙鏈RNA分子，常用于去除線性RNA分子，實(shí)現(xiàn)富集circRNA和套索RNA等非線性RNA的目的。
蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%；
無(wú)核酸外切酶殘留；
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品消化線性RNA能力相當(dāng)；
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA富集作用相當(dāng)。
蛋白純度（SDS-PAGE）≥95%
圖2：蛋白純度檢測(cè)：使用SDS-PAGE技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)品的蛋白純度，從左到右依次為相同產(chǎn)品濃度下不同體積（1 μL，2 μL，3 μL）的結(jié)果，結(jié)果表明翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品蛋白純度≥95%。
無(wú)核酸外切酶殘留
圖3：核酸外切酶殘留檢測(cè)：將20 U 翌圣RNase R加入到 0.5 μg λDNA- Hind Ⅲ digest中，于37℃孵育4小時(shí)，之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳 ，結(jié)果顯示DNA 條帶未發(fā)生變化，說(shuō)明翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品無(wú)核酸外切酶殘留。
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品消化線性RNA能力相當(dāng)
圖4：翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品消化線性RNA能力比較：將翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品分別投入含有線性RNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示當(dāng)RNase R產(chǎn)品的投入量達(dá)到2-4 U時(shí)，可觀察到RNA條帶變微弱甚至消失，表明RNase R對(duì)線性RNA分子具有消化作用，且翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品對(duì)線性RNA分子的消化能力相當(dāng)。
與A進(jìn)口品牌RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA富集作用相當(dāng)
圖5：翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品對(duì)circRNA的富集作用比較：將翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品分別投入含有circRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品處理后的RNA條帶亮度基本無(wú)差別，表明circRNA能耐受RNase R的消化。以上結(jié)果證實(shí)翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與A進(jìn)口廠家RNase R產(chǎn)品均能有效用于circRNA富集。
翌圣RNase R對(duì)線性RNA的切割效果優(yōu)于其他品牌
圖6：翌圣（Cat#14606ES）產(chǎn)品與廠家A和B的RNase R消化線性mRNA分子效果比較：將翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品與廠家A和B的RNase R產(chǎn)品分別投入含有1 μg 線性mRNA底物的反應(yīng)體系中進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示翌圣RNase R（Cat#14606ES）產(chǎn)品對(duì)線性RNA的消化效果優(yōu)于廠家A和B的RNase R。(數(shù)據(jù)來(lái)源于深圳**客戶)
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品規(guī)格 |
RNase R (20 U/μL) | 14606ES | 250U/2500U/10000U |
T7 RNA Polymerase GMP-grade (50 U/μL) | 10624ES | 5000U/50000U |
T7 RNA Polymerase GMP-grade (250 U/μL) | 10625ES | 10KU/100KU/2500KU/100MU |
mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade (10 U/μL) | 10614ES | 2000U/10000U/100000U/5MU |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase GMP-grade (50 U/μl) | 10612ES | 10KU/50KU/250KU/20MU |
Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade (1 U/μL) | 10620ES | 10 U/100U/1000U/40KU |
Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade (2 U/μL) | 10611ES | 500U/2000U/10000U |
Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL) | 10621ES | 10KU/20KU/100KU/1MU |
參考文獻(xiàn)：
Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circular RNA vaccines against SARS-CoV-2 and emerging variants. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
Chen L, Wang C, Sun H, et al. The bioinformatics toolbox for circRNA discovery and analysis. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
