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干貨│基因編輯探秘系列之在動植物育種領(lǐng)域的應(yīng)用

2024-9-2  閱讀(369)

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2024年5月29日,美國農(nóng)業(yè)部宣布蘇州齊禾生科生物科技有限公司研發(fā)的基因編輯高油酸大豆P16獲得監(jiān)管豁免。這標志著中國在美國市場成功獲得基因編輯產(chǎn)品的監(jiān)管豁免,展示了中國在生物技術(shù)領(lǐng)域的競爭力和基因編輯技術(shù)在農(nóng)業(yè)育種方面的巨大潛力。齊禾生科通過對大豆內(nèi)源脂肪酸脫氫酶基因進行精準編輯,成功培育出高油酸大豆P16。這一突破性成果不僅優(yōu)化了大豆的油脂組成,使大豆種子中的油酸含量提升至80%以上,還可能對提升其商業(yè)價值和市場競爭力產(chǎn)生積極影響。

 

CRISPR基因編輯技術(shù),作為繼野生馴化、雜交和轉(zhuǎn)基因之后的第四代育種技術(shù),標志著4.0育種時代的來臨。這項技術(shù)在改良重要經(jīng)濟物種性狀方面展現(xiàn)出了巨大的潛力,本文將從植物和動物育種兩個方向為大家詳細介紹CRISPR技術(shù)的應(yīng)用。


 

 

植物基因編輯育種

 

在植物育種領(lǐng)域,農(nóng)作物作為基因編輯技術(shù)的明星對象,已經(jīng)取得了令人矚目的成就。諸如糯玉米、高油酸大豆、抗褐變馬鈴薯、高GABA番茄、抗褐變蘑菇、抗除草劑水稻和抗除草劑玉米等基因編輯產(chǎn)品,在美國、日本等國家的市場上熠熠生輝,充分展現(xiàn)了基因編輯技術(shù)的巨大潛力。

 

玉米,這種重要的糧食和飼料作物,其關(guān)鍵性狀的優(yōu)化和育種技術(shù)的發(fā)展具有深遠的意義。在這方面,CRISPR技術(shù)如同一把神奇的鑰匙,已廣泛應(yīng)用于玉米的品質(zhì)改良。它涉及多個方面,包括提升產(chǎn)量(例如通過減小葉夾角以增加種植密度,進而提高行和籽粒產(chǎn)量)、改善食用品質(zhì)(如培育出糯玉米和甜玉米品種)、增強抗逆性(例如提升耐旱能力和抗除草劑能力),以及調(diào)控開花時間(在長日照條件下促使更早開花)等。接下來,小編將以玉米為例,為大家詳細介紹基于CRISPR技術(shù)的植物育種流程。

 

植物基因編輯的過程一般可分為六個步驟:

 
01
 

設(shè)計階段

依據(jù)目標基因序列,精確設(shè)計相應(yīng)的核酸酶和gRNA(向?qū)NA)。這一步驟關(guān)鍵在于確保所設(shè)計的gRNA能夠特異性識別并引導(dǎo)核酸酶至靶基因位點,以實現(xiàn)精準編輯。
02
 
構(gòu)建階段
構(gòu)建適用于基因編輯的元件。這包括質(zhì)粒載體形式、mRNA形式或RNP(核糖核蛋白復(fù)合體)形式。選擇合適的形式取決于實驗的具體要求和細胞類型。
03
 
驗證階段
在將構(gòu)建的編輯工具轉(zhuǎn)入目標細胞前,需通過原生質(zhì)體測試以驗證核酸酶的切割活性。利用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))、測序等技術(shù)來確認核酸酶的切割效率和精確性。
04
 
遞送階段
將基因組編輯試劑送入植物細胞。在植物中,CRISPR/Cas系統(tǒng)的遞送通常采用DNA形式,通過基因槍法或農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,將包含編輯系統(tǒng)的元件通過T-DNA形式插入至植物基因組。對于mRNA和RNP形式,一般通過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化或基因槍法實現(xiàn)遞送。
05
 
再生階段
通過組織培養(yǎng)技術(shù),將經(jīng)過基因組編輯的細胞再生成完整植株。這一步驟是實現(xiàn)植物基因編輯應(yīng)用的關(guān)鍵。
06
 
篩選與分型階段
對再生的植株進行篩選和基因分型,以確認基因組編輯是否成功,并識別具有預(yù)期基因型的植株。
07
 
表型觀察階段
對編輯后的植株進行培養(yǎng),并進行表型觀察分析。這一步驟有助于評估基因編輯對植物性狀的影響,從而驗證基因功能和進行后續(xù)應(yīng)用研究。

 

圖1. 基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的玉米基因組編輯技術(shù)流程[2]

 

與在植物育種領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用相呼應(yīng),基因編輯技術(shù)在動物育種領(lǐng)域同樣展現(xiàn)出了其廣泛的適用性和潛力。

 

 

動物基因編輯育種

 

基因編輯技術(shù)在動物育種領(lǐng)域的應(yīng)用范圍極為廣泛。在改良生產(chǎn)性能方面,通過編輯動物基因組,改良畜禽經(jīng)濟性狀,比如加快生長速度,提高飼料利用率等;在改善肉質(zhì)方面,基因編輯方法既可以降低動物脂肪量,還能夠調(diào)整其肌肉組織的構(gòu)成,以生產(chǎn)更符合市場和消費者需求的肉類產(chǎn)品;在增強家畜抗病能力方面,通過基因編輯開發(fā)出具備特定疾病抗性的新品種,能顯著提高動物種群的基因適應(yīng)性,減少養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用量。這一舉措不僅有助于保障人類健康,同時也是推動環(huán)境可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的關(guān)鍵因素[3]。下面,以基因編輯豬為例,我們將具體闡釋動物基因編輯的操作流程,揭示這項先進技術(shù)如何在現(xiàn)代畜牧業(yè)中發(fā)揮作用。

 

動物基因編輯的過程一般可分為六個步驟:

 
01
 

設(shè)計階段

根據(jù)目標基因序列,精確地設(shè)計出相應(yīng)的核酸酶和gRNA(向?qū)NA)。
02
 
構(gòu)建階段
根據(jù)實驗?zāi)康暮桶屑毎愋?,選擇合適的形式構(gòu)建基因編輯組件,可能包括質(zhì)粒載體、mRNA或RNP(核糖核蛋白復(fù)合體)等形式。
03
 
切割活性驗證階段
在體外環(huán)境下,運用PCR、測序等分子生物學技術(shù)檢驗gRNA的切割效率,保證其能夠高效精準地剪切目標基因。
04
 
轉(zhuǎn)染或注射階段
應(yīng)用細胞轉(zhuǎn)染、顯微注射或電穿孔等技術(shù),將編輯工具有效傳遞至目標細胞或胚胎內(nèi)。
05
 
培養(yǎng)階段
對經(jīng)過轉(zhuǎn)染或注射的細胞或胚胎進行適當條件下的培養(yǎng),以促進基因編輯的順利進行。
06
 
效果驗證階段
利用PCR、測序、Western blot等分析技術(shù),確認目標基因是否已成功被編輯。
07
 
表型觀察階段
對經(jīng)確認成功編輯的細胞或個體進行深入分析,例如觀察表型的變化、進行功能特性鑒定等,以評估基因編輯的實際效果與應(yīng)用價值。

 

圖2. 基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的基因編輯豬技術(shù)流程[4]

 

基因組編輯技術(shù)的迅猛進展在基因功能探究與作物特性優(yōu)化等領(lǐng)域已實現(xiàn)重大突破。隨著CRISPR/Cas系統(tǒng)的持續(xù)進化與精進,基于基因組編輯的前沿育種技術(shù)將進一步與高通量表型分析、基因組選擇、快速育種等技術(shù)深度整合,為農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)的創(chuàng)新發(fā)展注入強大動力。

 

 

產(chǎn)品推薦

 

產(chǎn)品應(yīng)用

產(chǎn)品定位

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

通用型

NLS的SpCas9

Cas9 Nuclease

14701ES

熒光觀察/流式分選

EGFP熒光標簽的SpCas9

NLS-Cas9-EGFP Nuclease

11364ES

基因調(diào)控

無剪切酶活性的Cas9

dCas9 Nuclease

11351ES

小分子量遞送

Cas12a

ArCas12a Nuclease

14702ES

Cas12b

AapCas12b Nuclease

14808ES

sgRNA制備

sgRNA合成

Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

11355ES

sgRNA純化

Hieff NGS® RNA Cleaner

12602ES

 

 

參考文獻:

[1] Gao C. Genome engineering for crop improvement and future agriculture. Cell. 2021 Mar 18;184(6):1621-1635.

[2] 楊夢冰, 江易林, 祝蕾, 安學麗, 萬向元. CRISPR/Cas植物基因組編輯技術(shù)及其在玉米中的應(yīng)用. 中國生物工程雜志, 2021, 41(12): 4-12.

[3] 張格陽, 張子敬, 翟亞瑩, 呂世杰, 朱肖亭, 朱進華, 李崢, 于翔, 王紅利, 施巧婷, 閆祥洲, 王二耀. 基因編輯技術(shù)在我國畜牧業(yè)的研究進展[J]. 中國畜禽種業(yè), 2022, 18(10): 45-48.

[4] Randall, S, Prathe, et al. Generation of a Commercial-Scale Founder Population of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Resistant Pigs Using CRISPR-Cas [J]. Scientific Reports, 2017. DOI:10.1038/s41598-017-13794-2.



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