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聚焦 HEK293 相關(guān)殘留檢測(cè),提升生物制品質(zhì)量控制水平

2025-6-30  閱讀(68)

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HEK293細(xì)胞在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用

HEK293細(xì)胞系是人胚胎腎細(xì)胞系,具有與人類(lèi)細(xì)胞相似的翻譯后修飾系統(tǒng),能夠生產(chǎn)出更接近天然人類(lèi)蛋白的重組蛋白。其在生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,尤其是在細(xì)胞和基因治療(CGT)產(chǎn)品生產(chǎn)中占據(jù)重要地位。許多治療性病毒載體,如慢病毒、腺相關(guān)病毒等,都在 HEK293 細(xì)胞中生產(chǎn)。隨著CGT領(lǐng)域的迅速發(fā)展,HEK293及其衍生細(xì)胞的應(yīng)用前景將更加廣闊。


殘留DNA風(fēng)險(xiǎn)及法規(guī)監(jiān)管要求

WHO和各國(guó)藥物注冊(cè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)均對(duì)生物制品中外源宿主DNA殘留提出了監(jiān)測(cè)和控制要求,以確保生物制品的安全性及質(zhì)量可控性。


WHO和美國(guó)FDA現(xiàn)行指導(dǎo)方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑,美國(guó)FDA還指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘留DNA不高于100 pg/劑。歐洲藥典通則規(guī)定生物制品殘留DNA限度大多為不超過(guò)10 ng/劑。中國(guó)藥典2020年版三部規(guī)定,以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑外源宿主細(xì)胞DNA殘留量不能超過(guò)100 pg/劑,以細(xì)菌或真菌基質(zhì)生產(chǎn)的疫苗DNA殘留量不能超過(guò)10 ng/劑。


除需對(duì)DNA的殘留量進(jìn)行控制外,DNA殘留片段大小分布也是確定其相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的重要指標(biāo)。有研究表明,一個(gè)功能基因至少在200 bp以上,因此大于200 bp有可能會(huì)有一定的致病性,而且殘留DNA片段越大,生物制品的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)越高。



SV40LTA & E1A 殘留 DNA 的法規(guī)監(jiān)管要求

HEK293T細(xì)胞是HEK293細(xì)胞系的衍生物,通過(guò)表達(dá)一個(gè)溫度敏感的SV40大T抗原突變體而建立。SV40是一種致瘤病毒,其大T抗原(LTA)序列和腺病毒E1A序列具有潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)。CDE(國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心)頒布的相關(guān)指導(dǎo)原則要求,對(duì)包裝病毒載體用細(xì)胞庫(kù)(如HEK293T細(xì)胞)攜帶的Adv E1A序列和SV40大T 抗原序列等具有潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)的特定轉(zhuǎn)化序列,均應(yīng)進(jìn)行殘留控制。


HEK293相關(guān)殘留檢測(cè)解決方案

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HEK293宿主殘留檢測(cè)


試劑盒線性范圍為:30fg/μL~300pg/μL,R2=1,擴(kuò)增效率為100.45%,各濃度檢測(cè)值CV<15%。


圖 1.HEK293 DNA標(biāo)曲線性圖(上)和擴(kuò)增曲線線性圖譜(下)


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HEK293宿主殘留片段分析


試劑盒含有四種不同長(zhǎng)度的擴(kuò)增片段:82 bp、133 bp、227 bp、515 bp,四片段線性范圍均為30 fg/μL~300 pg/μL,R2>0.99,擴(kuò)增效率在90%~110%之間,各濃度檢測(cè)值CV<15%。

圖2 .82 bp擴(kuò)增曲線圖譜(上)和133 bp擴(kuò)增曲線圖譜(下)


圖3 .227 bp擴(kuò)增曲線圖譜(上)和515 bp擴(kuò)增曲線圖譜(下)


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SV40LTA & E1A 殘留檢測(cè)


SV40LTA線性范圍在1.8×101~1.8×105copies/μL,R2=1,擴(kuò)增效率為100.25%,各濃度檢測(cè)值CV<15%;

E1A線性范圍在1.8×101~1.8×105copies/μL,R2=1,擴(kuò)增效率為100.25%,各濃度檢測(cè)值CV<15%。


圖4 .SV40LTA擴(kuò)增曲線圖譜(左)和E1A擴(kuò)增曲線圖譜(右)


產(chǎn)品特點(diǎn)

  • 符合法規(guī):按照法規(guī)要求進(jìn)行全面驗(yàn)證,可提供驗(yàn)證報(bào)告;

  • 保障品質(zhì):試劑盒原材料全自主研發(fā),qPCR Mix等酶產(chǎn)品在超潔凈酶工廠生產(chǎn);

  • 精密度高:批內(nèi)重復(fù)性高,批間差異??;

  • 專屬性強(qiáng):特異性檢測(cè)不受其他外源基因組DNA干擾。


產(chǎn)品詳情



產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

HEK293宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)試劑盒(3G)

50T/100T

41331ES

HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA片段分析試劑盒

4*50T/4*100T

41316ES

SV40LTA&E1A殘留DNA檢測(cè)試劑盒

50T/100T

41310ES

RCA (E1A)基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒

50T/100T

41321ES


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