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腫瘤發(fā)病和死亡情況異常嚴峻，其精準治療不容忽視，因此近年來各類腫瘤機制研究和創(chuàng)新療法開發(fā)的熱度居高不下。作為銜接基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，腫瘤動物模型在解析腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移機制以及藥物研發(fā)與評估中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。
腫瘤藥效研究
抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價是小動物光學(xué)成像技術(shù)的基礎(chǔ)應(yīng)用之一，利用熒光素酶標記腫瘤細胞，并移植入動物體內(nèi)建立腫瘤疾病動物模型，給藥后應(yīng)用小動物活體光學(xué)成像技術(shù)觀測腫瘤光學(xué)信號隨時間的變化情況，進而評價不同藥物、特定的給藥途徑、時間、劑量等給藥策略對于腫瘤的治療效果。
相較于分批處死動物以獲取實驗數(shù)據(jù)的傳統(tǒng)方法，活體成像技術(shù)利用細胞和分子水平的定性定量研究進行觀測記錄，在構(gòu)建原位成瘤CDX模型相關(guān)研究過程中，更便于跟蹤疾病進展及腫瘤轉(zhuǎn)移情況，使得腫瘤模型的動態(tài)監(jiān)測不似以往受限。
實驗流程方法
確定使用的螢光素酶
常見的螢光素酶有螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase，F(xiàn)luc），海腎螢光素酶（Renilla luciferase，Rluc），Gaussia螢光素酶。它們在特定的條件下都可以催化各自的底物發(fā)出對應(yīng)的光，這個過程無需激發(fā)器激發(fā)。其中，F(xiàn)luc是使用廣泛的螢光素酶。
構(gòu)建穩(wěn)定表達螢光素酶的細胞株
將帶有Fluc基因的載體通過轉(zhuǎn)染試劑等方法以一定手段轉(zhuǎn)入研究的腫瘤細胞中，并通過篩選得到穩(wěn)定表達Fluc的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。
皮下成瘤或原位成瘤
成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，即可進行動物移植模型構(gòu)建。此時一般是將Fluc細胞注射到小鼠體內(nèi)。
常見的實驗操作如下：
1. 準備對數(shù)期生長的、細胞密度達80 - 90%左右的Fluc腫瘤細胞。
2. 將細胞懸液和Ceturegel™基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進行稀釋。
3. 左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩處皮下注射.
活體成像觀測
細胞接種一段時間后，可以進行活體成像檢測。首先麻醉實驗動物， 接著注射底物熒光素，最佳的檢測時間是在注射后10 - 15 min之間。但需要注意的是，對于不同的動物模型，發(fā)光動力學(xué)過程并不全一致，最好先進行預(yù)實驗。
結(jié)果展示
注：探究抗腫瘤藥物HKB99對腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的影響。（DOI: 10.1016/j.cmet.2019.09.014?）
產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Ceturegel®Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5 mL/10 mL |
D-Luciferin,Sodium Salt | 40901ES01/02/03/08 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin,Potassium Salt | 40902ES01/02/03/09 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin Firefly,Free Acid | 40903ES01/02/03 | 100 mg/500 mg/1g |
Coelenterazine Native | 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine 400a | 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
Coelenterazine h 腔腸素h | 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine f | 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
