Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®

——DNA穩(wěn)定建庫(kù)

1、研發(fā)背景

穩(wěn)定的建庫(kù)產(chǎn)品，您用對(duì)了嗎？

DNA文庫(kù)制備是高通量測(cè)序前期的核心環(huán)節(jié)，文庫(kù)的產(chǎn)量與質(zhì)量直接決定了測(cè)序數(shù)據(jù)的產(chǎn)量與質(zhì)量。但目前市面上多數(shù)試劑盒的建庫(kù)方法，耗時(shí)、昂貴且操作非常繁瑣的。這些方法在性能方面也存在一定的缺陷：如僅適用于DNA量充足且品質(zhì)較好的樣本、Input DNA-片段化不*、常出現(xiàn)形成G尾、聚合物等副反應(yīng)或測(cè)序文庫(kù)表現(xiàn)出一定的偏好性等。這些情況顯著降低了DNA文庫(kù)的轉(zhuǎn)化率，并且極大影響后續(xù)測(cè)序數(shù)據(jù)的覆蓋度和準(zhǔn)確度。

Yeasen MaxUp，您的高通量測(cè)序建庫(kù)的！

翊圣生物根據(jù)現(xiàn)狀，集中海內(nèi)外高通量測(cè)序領(lǐng)域的科研人員，歷時(shí)數(shù)年，開(kāi)發(fā)了Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®常規(guī)DNA建庫(kù)試劑盒，從產(chǎn)品設(shè)計(jì)，產(chǎn)品原料選用，產(chǎn)品性能優(yōu)化，產(chǎn)品性能驗(yàn)證，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)制定，到產(chǎn)品成型，產(chǎn)品規(guī)?；a(chǎn)，每一步都在嚴(yán)苛的標(biāo)準(zhǔn)、精細(xì)的研究中，實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)品品質(zhì)的飛躍。

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®在文庫(kù)產(chǎn)量與質(zhì)量方面表現(xiàn)：DNA的文庫(kù)構(gòu)建步驟少、轉(zhuǎn)化率高，相對(duì)進(jìn)口同款品牌至少高出20%，使文庫(kù)擴(kuò)增循環(huán)數(shù)更低，顯著降低了測(cè)序數(shù)據(jù)的冗余度和偏好性。在建庫(kù)速度、簡(jiǎn)便性、性價(jià)比以及樣本適用性方面，達(dá)到*品質(zhì)。

2、產(chǎn)品描述

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®是針對(duì)Illumina^®高通量測(cè)序平臺(tái)專(zhuān)業(yè)開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的建庫(kù)試劑盒。本試劑盒可將低至1ng的微量片段化DNA制備成適用于Illumina^®測(cè)序平臺(tái)的文庫(kù)。該試劑盒精心優(yōu)化的配方體系，使他廣泛適用于各種DNA樣本。試劑盒整合了多個(gè)酶反應(yīng)步驟，提供簡(jiǎn)并、線性化的操作方案，顯著提高DNA建庫(kù)效率。

Hieff NGS^TM產(chǎn)品具有嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝，保證提供的每批次產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，zui高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

1）2.75小時(shí)建庫(kù)

Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®提供簡(jiǎn)并的、線性化的操作方案，將DNA建庫(kù)時(shí)間縮短至2.75小時(shí)以內(nèi)。

圖1 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對(duì)進(jìn)口品牌N*Ultra同類(lèi)型產(chǎn)品，建庫(kù)更快。

2）文庫(kù)轉(zhuǎn)化率高

文庫(kù)轉(zhuǎn)化率，即DNA-片段轉(zhuǎn)化為雙端帶特定接頭DNA-片段的效率，是衡量建庫(kù)試劑盒效率的重要指標(biāo)。文庫(kù)轉(zhuǎn)化率強(qiáng)烈影響文庫(kù)的多樣性和質(zhì)量，文庫(kù)轉(zhuǎn)化率高在一定程度上意味著測(cè)序覆蓋度更好。

圖2 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對(duì)進(jìn)口品牌N*Ultra同類(lèi)型產(chǎn)品具有更高的文庫(kù)轉(zhuǎn)化率。

樣本：片段化E.coli gDNA。接頭比例：按各款試劑盒中推薦的數(shù)值。測(cè)定方法： qPCR文庫(kù)定量。

3）文庫(kù)擴(kuò)增循環(huán)數(shù)少

獲得特定產(chǎn)量文庫(kù)所需的PCR循環(huán)數(shù)，是衡量試劑盒建庫(kù)效率的另一重要指標(biāo)。PCR循環(huán)數(shù)不足，可能造成文庫(kù)產(chǎn)量低；PCR循環(huán)數(shù)過(guò)高，又將導(dǎo)致文庫(kù)偏好性增加、冗余度增加、嵌合產(chǎn)物增加、擴(kuò)增突變積累等多種不良后果。在獲得相同產(chǎn)量文庫(kù)時(shí)，使用的PCR循環(huán)數(shù)越少，表示試劑盒的建庫(kù)效率更高。

表1 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®相對(duì)進(jìn)口品牌N*Ultra同類(lèi)型產(chǎn)品具有更低的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。

4）優(yōu)異的文庫(kù)質(zhì)量

使用Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®對(duì)100 ng E.coli gDNA建庫(kù)，所得文庫(kù)均為單一條帶，正態(tài)分布，無(wú)雜峰，片段大小符合測(cè)序要求。

圖3 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®所建文庫(kù)Agilent 2100 Bioanalyzer檢測(cè)。

建庫(kù)樣本：片段化E. coli gDNA。雙輪分選比例（Post-adapter Ligation）：0.6×/0.2×和0.55×/0.15×。

5）的測(cè)序數(shù)據(jù)

測(cè)序數(shù)據(jù)是反映建庫(kù)試劑盒性能的zui重要指標(biāo)。使用Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®和N*Ultra品牌同類(lèi)型產(chǎn)品用于大腸桿菌基因組DNA文庫(kù)構(gòu)建，并使用Illumina^® Hiseq 4000平臺(tái)，以PE150模式進(jìn)行測(cè)序。所得Q30、堿基質(zhì)量，Mapped Reads以及Coverage等方面均與品牌N*Ultra同類(lèi)型產(chǎn)品相當(dāng)，表現(xiàn)優(yōu)異。

表2 大腸桿菌K12菌株基因組DNA測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

Input DNA: 100ng. Illumina Hiseq 4000, PE 150, reference genome: Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655.

圖4. Yeasen樣品測(cè)序數(shù)據(jù)Fastqc報(bào)告（左：序列質(zhì)量分布；右：堿基分布）。

6）*的性價(jià)比

Yeasen致力于為您提供的產(chǎn)品??！

圖5 Hieff NGS^TM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®性價(jià)比更高。

3、產(chǎn)品應(yīng)用：

將1ng-1μg片段化DNA制備成適用于Illumina^®測(cè)序平臺(tái)的文庫(kù)。

4、文獻(xiàn)引用

[1] Head S R, Komori H K, LaMere S A, et al. Library construction for next-generation sequencing: overviews and challenges[J]. Biotechniques, 2014, 56(2): 61.

[2] Parkinson N J, Maslau S, Ferneyhough B, et al. Preparation of high-quality next-generation sequencing libraries from picogram quantities of target DNA[J]. Genome research, 2012, 22(1): 125-133.

[3] van Dijk E L, Jaszczyszyn Y, Thermes C. Library preparation methods for next-generation sequencing: tone down the bias[J]. Experimental cell research, 2014, 322(1): 12-20.

[4] Wolf K, O'Neil D, Schroeer S, et al. Next‐Generation Sequencing Library Preparation from FFPE Tissue Samples[J]. Current Protocols in Molecular Biology, 2016: 7.24. 1-7.24. 14.

[5] Apone L, Liu P, Panchapakesa V, et al. Enhancing clinical utility of NGS with reduced bias, low DNA input, library construction[J]. 2016.

5、常見(jiàn)問(wèn)題

Q: 該款試劑盒適用于哪些樣本的建庫(kù)？

A：本試劑盒適用于所有樣本的DNA建庫(kù)。

Q: 在使用該款試劑盒時(shí)，不同類(lèi)型的樣本的Input DNA量應(yīng)為多少？

A：Input DNA特指投入末端修復(fù)/dA尾添加步驟中的DNA。下表列舉了本試劑盒在常見(jiàn)應(yīng)用中推薦的Input DNA量。

表1 常見(jiàn)應(yīng)用中推薦Input DNA量

【注】：上表為使用高質(zhì)量DNA時(shí)推薦的Input DNA量，當(dāng)Input DNA質(zhì)量較差或需要進(jìn)行片段分選時(shí)，應(yīng)適當(dāng)上調(diào)使用量。

Q: 文庫(kù)制備過(guò)程中，是否需要片段長(zhǎng)度分選？

A：文庫(kù)制備過(guò)程中需要進(jìn)行片段長(zhǎng)度分選。分選步驟可選擇在末端修復(fù)/dA尾添加之前，或在接頭連接之后，或在文庫(kù)擴(kuò)增之后進(jìn)行。當(dāng)Input DNA質(zhì)量≥50ng，您可選擇在接頭連接后分選；如Input DNA質(zhì)量<50ng，建議您在文庫(kù)擴(kuò)增后進(jìn)行分選。

Q: 使用該款試劑盒所得的文庫(kù)是否可以用于Ion Torrent平臺(tái)？

A：本款試劑盒針對(duì)Illumina^®平臺(tái)開(kāi)發(fā)，所得文庫(kù)僅適用于Illumina^®平臺(tái)。

Q: 產(chǎn)品的有效期與保存方法？

A：產(chǎn)品所有組分-20°C保存，有效期1年。

Q: 純化和分選步驟，可以使用哪些磁珠？

A：純化和分選步驟，建議使用Hieff NGS^TM DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產(chǎn)品。

6、訂購(gòu)信息

7、相關(guān)產(chǎn)品推薦

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