ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide), for live-cell imaging

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針（活細(xì)胞）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

ER-Tracker探針是一系列具有細(xì)胞膜透過(guò)性，對(duì)活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC₆(3)，該系列探針幾乎不對(duì)線粒體著色，且在較低濃度即可實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對(duì)活細(xì)胞染色后用醛固定，可以部分保留活細(xì)胞的染色特征。

本品為ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide)，由綠色熒光染料BODIPY? FL和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成，其Ex= 504 nm，Em= 511nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一種常用降血糖藥物，在胰島β細(xì)胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細(xì)胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度結(jié)合ATP-敏感型K⁺通道的磺脲受體，且本受體富集存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，因此適合用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針。

本品為溶于DMSO的1mM ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide)儲(chǔ)存液，推薦工作濃度為～1μM。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸?！?/span>-20℃避干燥保存，至少六個(gè)月有效。避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 避免反復(fù)凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲(chǔ)存于無(wú)霜冰箱。
2. DMSO有毒，請(qǐng)小心操作。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細(xì)胞系驗(yàn)證。但不同的細(xì)胞類(lèi)型其*使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。

1. 試劑準(zhǔn)備

使用前將ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide)回溫至室溫，并簡(jiǎn)短離心使該DMSO溶液至管底。

2.  細(xì)胞樣品處理及染色

2.1 將1mM ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide)儲(chǔ)存液按照實(shí)驗(yàn)要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度為～1μM。建議在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過(guò)高染色導(dǎo)致的假象。

注：使用含Ca²⁺、Mg²⁺ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進(jìn)行染色，可得到*實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.2 染色

對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液于37℃孵育細(xì)胞15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

細(xì)胞如需固定，請(qǐng)參考以下步驟。

3．細(xì)胞固定

3.1 固定細(xì)胞：用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞2min。

【注】：已染色細(xì)胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Green (BODIPY^? FL Glibenclamide)留在細(xì)胞內(nèi)，熒光信號(hào)會(huì)有部分衰減。

3.2 清洗觀察細(xì)胞：細(xì)胞固定后，可用合適緩沖液進(jìn)行清洗，每次5min，共2次。清洗后可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)封片、鏡檢或進(jìn)一步染色。

【注】：不建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行透化處理，因?yàn)榻?jīng)Triton X-100透化后，無(wú)信號(hào)保留。

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