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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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40769ES60DAF-FM DA Solution （5mM in DMSO）
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40769ES60 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1360更新時間：2022-02-10 15:00:46
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
產(chǎn)品介紹
DAF-FM DA Solution (5mM in DMSO) 一氧化氮檢測探針
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
DAF-FM DA Solution (5mM in DMSO) 一氧化氮檢測探針 | 40769ES60 | 100T | -20℃ | 1323.00 |
產(chǎn)品描述
DAF-FM DA即4-Amino-5-Methylamino-2',7'-Difluorofluorescein Diacetate，也稱DAF-FM Diacetate，是一代用于一氧化氮（nitric oxide, NO）定量檢測的探針，其檢測原理為：DAF-FM DA可以穿過活細(xì)胞膜（cell-permeable），進(jìn)入細(xì)胞后可以被胞漿內(nèi)的酯酶催化形成不能穿過細(xì)胞膜的DAF-FM。DAF-FM本身僅有很弱的熒光，光量子約0.005，但在與NO反應(yīng)后生成熒光素-苯駢三氮唑（benzotriazole），發(fā)強(qiáng)烈綠色熒光，光量子約0.81。Ex~495nm，Em~515nm。任何可以檢測熒光素（fluorescein）的儀器，包括熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光分光光度計或熒光酶標(biāo)儀都可以用于該熒光探針的檢測。
DAF-FM DA是一代NO檢測探針，與以往zui成功且應(yīng)用zui廣泛的一氧化氮熒光檢測探針DAF-2 Diacetate相比較，具有多方面的改進(jìn)：1）DAF-FM DA和NO加合反應(yīng)形成的熒光產(chǎn)物在pH5.5以上不受pH影響；2）DAF-FM DA和NO加合反應(yīng)形成的產(chǎn)物熒光更加穩(wěn)定，不容易淬滅，這樣更加便于檢測；3）DAF-FM DA對一氧化氮的檢測靈敏度更高，其zui低檢測濃度可達(dá)到3nM，而DAF-2 Diacetate的zui低檢測濃度約為5nM。
本品為溶解于DMSO的淡黃色溶液，濃度為5mM。本品適用于檢測細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮水平，推薦工作濃度為1-10μM。如果收集細(xì)胞后再裝載探針，通常至少可以檢測100個樣品。
產(chǎn)品性質(zhì)
英文別名（English Synonym） | 4-Amino-5-(N-methylamin)-3′,6′-bis(acetyloxy); Diaminofluorescein-FM diacetate; 3-Amino,4- aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate; 4-Amino-5-(N-methylamino)-3′,6′-bis(acetyloxy)-2′,7′ -difluoro-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthen]-3-one; |
CAS號（CAS NO.） | 254109-22-3 |
分子式（Formula） | C25H18F2N2O7 |
分子量（Molecular Weight） | 496.42 |
純度（Purity） | ＞98% |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
|
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 | 保存方式 |
40769-A | DAF-FM DA儲存液 DAF-FM DA Solution（5mM） | 20μl | -20oC避光保存 |
40769-B | DAF-FM DA 稀釋液 DAF-FM DA Diluent | 50ml | -20oC保存 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，DAF-FM DA需避光保存，一年有效。
注意事項
- BSA和酚紅對該熒光探針的檢測有干擾，需避免；
- 使用前請將本品分裝成小規(guī)格于-20℃凍存，以避免反復(fù)凍存；
- 熒光探針工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
- DAF-FM DA在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃溫浴片刻至全部溶解后使用。
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 裝載探針
【注意】：
- 對于刺激時間較短（通常為2h以內(nèi)）的細(xì)胞，先裝載探針，后用適當(dāng)?shù)年栃詫φ占白约焊信d趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長（通常為6h以上）的細(xì)胞，先用適當(dāng)?shù)年栃詫φ占白约焊信d趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。
- DAF-FM DA探針的推薦使用濃度為1-10μM，初次使用需根據(jù)自身實驗體系來進(jìn)行加載濃度，孵育時間和溫度的優(yōu)化。原則上來說，以zui低濃度探針檢測且產(chǎn)生足量信噪比的熒光信號為宜。另縮短孵育時間可減少亞細(xì)胞區(qū)室化現(xiàn)象。
- 以下步驟使用的工作濃度（1:1000倍稀釋，即5μM）和孵育時間（37℃，20min）僅做為參考，可根據(jù)實際情況來調(diào)整。比如，對于某些細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)未被刺激的陰性對照細(xì)胞熒光也比較強(qiáng)，可降低DAF-FM DA的加載濃度至1-2.5μM。相反，如果發(fā)現(xiàn)用感興趣的藥物刺激后熒光較弱，可升高DAF-FM DA的加載濃度為10μM，以提高檢測的靈敏度。另外，探針裝載的時間也可以根據(jù)情況在15-60min內(nèi)適當(dāng)進(jìn)行調(diào)整，孵育溫度在4℃-37℃內(nèi)調(diào)整。
- 原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。
按照1:1000比例，用DAF-FM DA稀釋液稀釋DAF-FM DA（5mM），即終濃度為5μM。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DAF-FM DA。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常情況下六孔板內(nèi)單孔需要約1ml的DAF-FM DA工作液。37℃孵育20min。PBS，pH7.4洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DAF-FM DA。
- 收集細(xì)胞后裝載探針：本方法適用于貼壁細(xì)胞和懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。
按照1:1000比例，用DAF-FM DA稀釋液稀釋DAF-FM DA（5mM），即終濃度為5μM。細(xì)胞收集后，用稀釋好的DAF-FM DA重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度為1×106-2×107/ml，37℃孵育20min。上述操作可以在離心管內(nèi)進(jìn)行。每隔3-5min顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。PBS，pH7.4洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DAF-FM DA。直接用適當(dāng)?shù)年栃詫φ栈蜃约焊信d趣的藥物刺激細(xì)胞，或把細(xì)胞等分成若干份后再刺激細(xì)胞。
2. 檢測
2.1 對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡或普通的熒光顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。
2.2 對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測，也可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
3. 參數(shù)設(shè)置
使用Ex=495nm，Em=515nm，實時、逐時間點或單時間點檢測刺激前后熒光的強(qiáng)弱。DAF-FM和 NO反應(yīng)產(chǎn)物的熒光光譜和熒光素（fluorescein）非常相似，可以用檢測熒光素（fluorescein）的參數(shù)設(shè)置進(jìn)行檢測，也可用檢測FITC的參數(shù)設(shè)置進(jìn)行檢測。
