Coomassie Brilliant Blue G250 考馬斯亮藍(lán)G250染色液

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述
 

考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結(jié)構(gòu)上前者比后者多了2個(gè)甲基，命名上“G"為Green 的縮寫，因G250的藍(lán)色染料泛淺綠色；命名上“R"為Red的縮寫，因R250的藍(lán)色染料呈微紅色調(diào)；“250"表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實(shí)驗(yàn)中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力，考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。

考馬斯亮藍(lán)G250染色液更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達(dá)0.1 µg蛋白。但是染色背景比較深，需要褪色后才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察?？捡R斯亮藍(lán)G250對(duì)蛋白膠染色的靈敏度相對(duì)較差，zui低檢測(cè)到0.5 µg蛋白。但是因其在三Cl|乙|酸中不溶而以膠體形式存在，選擇性的和蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，染色迅速，著色深的蛋白質(zhì)條帶數(shù)秒內(nèi)可以顯現(xiàn)出來，約45 min后著色最深。而且染色背景低，不需要脫色即可進(jìn)行蛋白條帶的觀察。因此，非常適合對(duì)電泳凝膠蛋白的快速定性分析。

考馬斯亮藍(lán)G250較多的用于溶液體系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白結(jié)合檢測(cè)法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，Bradford試劑（也就是酸化的G250溶液）為陽離子，主要為雙質(zhì)子化，溶液為紅色，其最大吸收波長(zhǎng)（Amax）為470 nm。當(dāng)與蛋白穩(wěn)定結(jié)合后，G250以陽離子，非質(zhì)子化的形式存在，溶液變?yōu)樗{(lán)色，最大吸收波長(zhǎng)遷移到595 nm。藍(lán)色陽離子形式染料的量與樣本中蛋白的量成正比，因此通過直接測(cè)定595 nm的吸光度來反映蛋白量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于G250與蛋白質(zhì)結(jié)合所需的時(shí)間較短（約2 min左右），且結(jié)合的G250-蛋白質(zhì)復(fù)合物室溫下約1 h內(nèi)保持穩(wěn)定。反應(yīng)靈敏度高，是一種非常常用的微量蛋白快速定量方法。

產(chǎn)品性質(zhì)
 

運(yùn)輸與保存方法
 

室溫運(yùn)輸和保存即可。

使用方法
 

1.快速染色步驟（考馬斯亮藍(lán)G250）
1）考馬斯亮藍(lán)G250染色液的配制

將0.2 g G250溶于100 mL水中（需要加熱至50°C促進(jìn)溶解）。冷卻后，加入100 mL 2 N H2S04。室溫放置3 h-過夜，然后濾紙除雜。過濾后的溶液，小心加入22.2 mL 10 N KOH，然后加入28.7 g TCA。混勻后室溫放置>3 h，再次過濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液，不含藍(lán)色沉淀。

2）染色只需將膠浸在此染色液中，約15 min后條帶就會(huì)顯示出來。幾個(gè)小時(shí)后染色條帶的亮度和靈敏度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。

3）染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。

2.Bradford蛋白定量檢測(cè)（考馬斯亮藍(lán)G250）
參考Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：20202ES76）的操作步驟。

注意事項(xiàng)
 

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

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