產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，特別適合于大分子量DNA的高效轉(zhuǎn)化。具有四環(huán)素和氯霉素抗性，使用Puc19質(zhì)粒測(cè)得其轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸cfu/μg，主要具有如下特點(diǎn)：

① Hte表型可增強(qiáng)較大分子量質(zhì)粒和連接產(chǎn)物的高效轉(zhuǎn)化；

② 具有限制性內(nèi)切酶缺陷性，更利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提??；

③ 更適于質(zhì)粒文庫(kù)的構(gòu)建；

④ 具有lacIqZΔM15，可用于藍(lán)、白斑篩選。

本品基因型：

Tet^rΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F′proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^r) Amy Cam^r]。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸。

XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞-80℃保存，pUC19質(zhì)粒-20℃保存。有效期半年。不能保存于液氮！

注意事項(xiàng)

1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。

3）為確保zui高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫，且每次轉(zhuǎn)化感受態(tài)使用量，不低于100μl。

4）為防止轉(zhuǎn)化不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，zui低化實(shí)驗(yàn)可能遇到的風(fēng)險(xiǎn)。

使用方法

1）取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。

2）向100μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.1-50ng（＜10μl /100μl感受態(tài)）目的DNA或2μl連接產(chǎn)物，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30min。

3）置于42℃水浴中熱激30s，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冷卻2-3min，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

4）向離心管中加入900μl 42℃預(yù)熱的無(wú)菌NZY⁺培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1h（225-250rpm），目的是促使菌體復(fù)蘇。

  【注】：此步也可用LB培養(yǎng)基（不含抗生素）進(jìn)行菌體復(fù)蘇。

5）取上述≤200μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂至含有相應(yīng)抗生素的LB固體平板上，將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)一個(gè)晚上。

【注】：如需做藍(lán)白斑篩選，需至少孵育17h，以充分顯色。

附錄一：常用抗生素工作濃度

附錄二 NZY⁺培養(yǎng)基配方

10 g of NZ amine (casein hydrolysate)

5 g of yeast extract

5 g of NaCl

Add deionized H₂O to a final volume of 1 liter

Adjust to pH 7.5 using NaOH and then autoclave

Add the following filer-sterilized supplements prior to use:

12.5 ml of 1 M MgCl₂

12.5 ml of 1 M MgSO₄

20 ml of 20% (w/v) glucose (or 10 ml of 2 M glucose)

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