產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

線性化聚乙烯亞胺PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑是一種高電荷陽離子聚合物，非常容易結(jié)合帶負電荷的核酸分子，形成復合物，并使該復合物進入細胞中。該轉(zhuǎn)染試劑是一種瞬時轉(zhuǎn)染試劑，細胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高，在HEK293和CHO等細胞中基因表達效率較高。目前已經(jīng)驗證線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細胞等。該試劑與含血清的培養(yǎng)基兼容，能高效的將核酸導入細胞。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸與保存方法

運輸方式：室溫運輸。
保存方式：粉末在室溫或4 oC保存，有效期2年。儲存液-20 °C保存，有效期1年；4 °C保存，有效期2周。不可重新凍存。

注意事項

1）配置好的PEI溶液從-20 oC拿出融化后，可放在4 oC冰箱保存，絕不可重新凍存。

2）對大多數(shù)細胞來而言，每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及通風櫥操作。

4）本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于人體。

儲存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。

2. 配置儲存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃燒杯，將1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q^®超純水或其他相當級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻，產(chǎn)生小渦。

2）邊攪拌邊滴加入鹽酸（12 mol/L）調(diào)節(jié)pH，直至pH＜2.0。

3）蓋上燒杯頂部并攪拌3小時至*溶解；整個過程要保持pH＜2.0。

【注】：可能會存在一些小纖維狀顆粒不能溶解，這是正?，F(xiàn)象。

4）邊攪拌邊滴加入NaOH（10 mol/L）調(diào)節(jié)pH，直至到6.9 ~7.1。

5）將溶液轉(zhuǎn)入量筒內(nèi)，并加水定容到1 L。

6）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液。

7）根據(jù)需要分裝并儲存在-20 °C，1年穩(wěn)定。

【注】：儲存液再次融化后，可置于4 °C保存，2周穩(wěn)定，但絕不可重新凍存。

轉(zhuǎn)染操作流程（以6孔板為例）

1.接種細胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細胞，以轉(zhuǎn)染時細胞密度在 70%~80%為宜。

2.準備DNA-PEI復合物：按照以下體系配制DNA-PEI核酸-轉(zhuǎn)染試劑復合物：

1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養(yǎng)基稀釋2 μg目的DNA ，充分混勻成 DNA稀釋液。

【注】：無血清稀釋液建議采用 Opti-MEM或ddH₂O

2）立刻向100 μL的DNA稀釋液中加入5 μL的PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑，旋渦10秒，充分混勻。

3）在室溫下孵育10~25 min，使得形成DNA-PEI陽離子核酸轉(zhuǎn)染試劑復合物。

3.轉(zhuǎn)染細胞：

1）在形成復合物過程中，移除細胞生長培養(yǎng)基，每孔中加入2 mL新鮮預熱的*培養(yǎng)基。

2）直接將100 μL DNA-PEI核酸-PEI復合物加入細胞中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。

3）37 ℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后最快7 h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。

4.穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選（可選）

轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），37 ℃，5% CO₂培養(yǎng)箱孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
不同細胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：

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