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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> 10180ES50-動物組織直接PCR試劑盒 Animal Tissue Direct PCR Kit
貨物所在地：上海上海市
更新時間：2025/1/3 21:00:07
訪問次數(shù)：355
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Cat#:10126 冰袋運(yùn)輸 &保存方式詳見各組分 |
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動物組織直接PCR試劑盒 Animal Tissue Direct PCR Kit | |
使用手冊V1.1
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本產(chǎn)品僅作科研用途！ 上海翊圣生物科技有限公司 ：4006-111-883 : order@yeasen.com | |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 10126ES50 | 50T | 326.00 |
Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 10126ES70 | 200T | 1236.00 |
產(chǎn)品描述
動物組織直接PCR試劑盒是一種可直接對不同動物組織進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)。試劑盒中采用*的裂解緩沖液體系，可以簡便快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組DNA。整個過程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代謝物，也無需有機(jī)溶劑抽提，即可得到質(zhì)量穩(wěn)定的基因組DNA，無需后續(xù)純化步驟即可直接用于PCR反應(yīng)。而且樣品需求量小，少到5mg動物組織即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
試劑盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合物，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，并以dUTP替代了dTTP，另外加入了能夠降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應(yīng)前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物，UNG 酶對不含有尿嘧啶的模板不會造成任何影響，從而保證擴(kuò)增的特異性和準(zhǔn)確性，防止了大規(guī)?；驒z測時可能出現(xiàn)的PCR產(chǎn)物污染問題。優(yōu)化的2×Tissue Master Mix與直接裂解液配合使用能夠快速簡便地對樣品進(jìn)行檢測，并具有靈敏度高、兼容性強(qiáng)、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因型鑒定、動物基因分型等多種大規(guī)?；驒z測。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | 儲存 | |
10180ES50（50T） | 10180ES70（200T） | |||
10180-A | 2 × Tissue Master Mix* | 500 μl | 1 ml×2 | -20℃ |
10180-B | Buffer AL | 5 ml | 20 ml | 室溫或4℃ |
10180-C | Protease | 220 μl | 880 μl | 4℃ |
10180-D | 6× DNA Loading Buffer | 1.5ml | 1.5ml | 4℃ |
*2 × Tissue Master Mix中包含Tissue Taq DNA 聚合酶、UNG酶、dNTP（dUTP替代了dTTP）、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。
運(yùn)輸方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。
保存方法
① 本試劑盒的10180-A【2×Tissue Master Mix】保存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
② 10180-B【Buffer AL】在常溫干燥條件下，可保存12個月，如需保存更長時間可置于4℃。
③ 10180-C【Protease】溶液具有*配方，常溫保存（25℃）可長期具有活性，在4℃保存，其活性和穩(wěn)定性會更好，因此建議將其置于在4℃保存，請勿置于-20℃保存。
注意事項(xiàng)
1）本試劑盒適用于常規(guī)PCR，請勿用于多重PCR鑒定；建議擴(kuò)增片段在1kb以內(nèi)。
2）注意實(shí)驗(yàn)用具的清潔以及實(shí)驗(yàn)的操作手法，避免樣本間的交叉污染。
3）建議采用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。
4）Buffer AL若低溫保存，容易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
5）電泳檢測時，切勿使用含有 SDS 的 Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6）建議設(shè)立陽性及陰性對照反應(yīng)。陽性對照可用50ng純化的動物DNA為模板，陰性反應(yīng)以ddH2O為模板，引物可采用以前成功擴(kuò)增的引物。
7）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
操作方法
1. 取5-10mg動物材料，置于離心管中。盡量剪碎動物材料，以使之后的酶解反應(yīng)容易進(jìn)行。
2. 取100μl Buffer AL并加入4μl Protease，渦旋混勻。
3. 向混合液中加入動物組織，渦旋混勻。
4. 65℃孵育10-30min，然后95℃處理5min。
【注】：65℃孵育，一般只需10min即可滿足多數(shù)PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難酶解，可以將時間延長至30min。組織塊不需*酶解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。
5. 12,000 rpm (~13,400×g )離心5min。
6. 轉(zhuǎn)移上清至新的離心管，4℃或-20℃放置備用或直接用于PCR擴(kuò)增。
【注】：用于后續(xù)PCR檢測時，模板量占PCR體系的1-10%之間，不能超過20%。如50μl 的PCR體系中，加入0.5-5μl 裂解液即可，但不能超過10μl。
7. PCR反應(yīng)體系配制*
按照下表配制PCR反應(yīng)體系，配置好反應(yīng)體系后，短暫渦旋充分混勻并瞬時離心，將所有試劑收集到管底。
ddH2O | Up to 20μl |
2 × Tissue Master Mix | 10μl |
正向引物（10μM） | 0.5μl |
反向引物（10μM） | 0.5μl |
模板 DNA | xμl |
【*】：① 配制的PCR反應(yīng)體系可根據(jù)所需終體系（如50μl）按照該比例進(jìn)行調(diào)整。
② 通常引物終濃度為0.2-0.25μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
8. PCR反應(yīng)條件設(shè)置
此表PCR反應(yīng)條件僅供參考。PCR反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。具體操作中需要根據(jù)模板類型、目的片段大小、擴(kuò)增片段的堿基序列和引物的GC含量及長短等具體情況來優(yōu)化的反應(yīng)條件，包括退火溫度，延伸時間等。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
UNG酶處理 | 50℃ | 5min | 1 |
滅活UNG酶&預(yù)變性 | 94℃ | 5min | 1 |
變性 | 94℃ | 10sec | 30-40循環(huán) |
退火a | 50-65℃ | 20sec | |
延伸b | 72℃ | 30 sec/kb | |
*延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
【注】：a. PCR程序中的退火溫度需根據(jù)引物的Tm值自行設(shè)置；
b. 延伸時間需要根據(jù)片段的長度來確定，對于1kb以內(nèi)的DNA片段，建議延長時間為30sec。
常見問題與解答
常見問題 | 分析原因 | 解決方式 |
陽性對照、待測樣本均無條帶 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。 | 使用梯度PCR 摸索反應(yīng)條件。 |
PCR 試劑保存不當(dāng)失去活性。 | 2 × Tissue Master Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。確保在10天內(nèi)用完。 | |
引物設(shè)計(jì)問題。 | 嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱 | 加入組織裂解液過量。 | 增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。 |
樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時間過久，DNA基因組已被降解。 | 裂解混合液液可于4℃保存 2-3 天，盡量使用新鮮制備的裂解混合液進(jìn)行 PCR。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應(yīng)體系 10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時，可以將模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。 | |
PCR 循環(huán)數(shù)不足。 | 適當(dāng)增加 PCR 的循環(huán)數(shù)，35-40 循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA 模板多 5-10 個循環(huán)為佳。 | |
非特異性擴(kuò)增 | 退火溫度偏低。 | 適當(dāng)提高退火溫度?；?qū)ν嘶饻囟茸鲆粋€梯度摸索。 |
PCR 循環(huán)數(shù)過多。 | 適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，推薦在 35-40 循環(huán)為佳。 | |
引物濃度偏高。 | 適量降低引物用量。通常引物終濃度為 0.2μM 可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可以在0.1-0.5μM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。 | |
模板加入量過多。 | 將模板加入量控制在10-20%。反應(yīng)效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于 10%的范圍。 | |
空白對照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。 |
樣本間交叉污染。 | 每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入 2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
10180ES50 | Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 50T | 326.00 |
10180ES70 | Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 200T | 1236.00 |
10182ES50 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 50T | 326.00 |
10182ES70 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 200T | 1236.00 |
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