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供應簡介

吉滿生物的GM easyTM 慢病毒包裝試劑盒（GM easyTM Lentiviral Packaging Kit ，Cat.No. GMeasy-10,20/40）包括優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質?；旌衔铮℅M easyTM Lentiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒和高效轉染試劑（HG TransgeneTM Reagent），

詳細介紹

Cat.No. GMeasy-10（10個10cm皿）

Cat.No. GMeasy-20（20個10cm皿）

Cat.No. GMeasy-40（40個10cm皿）

產(chǎn)品簡介

吉滿生物的GM easy^TM 慢病毒包裝試劑盒（GM easy^TM Lentiviral Packaging Kit，Cat.No. GMeasy-10,20/40）包括優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質粒混合物（GM easy^TM Lentiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒和高效轉染試劑（HG Transgene^TM Reagent），吉滿的慢病毒包裝試劑盒，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒，其優(yōu)勢在于慢病毒包裝時間周期短（一周之內(nèi)即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒，可應用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。

產(chǎn)品組分及保存

品名	Cat.No.	內(nèi)容	保存
GM easy^TM Lentiviral Mix	GMLCP-10 GMLCP-20 GMLCP-40	100 μl（1μg/μl） 200 μl（1μg/μl） 400 μl（1μg/μl）	-20℃
HG Transgene^TM Reagent	HGTG-06 HGTG-12	0.6 ml 1.2 ml 1.2 ml*2	4℃
eGFP對照質粒（Amp⁺）	GMLNC-01	1.5 μg	-20℃

慢病毒包裝所需其他材料（選用）

1. DMEM：GIBCO

2. FBS：GIBCO

3. Penicillin-Streptomycin：GIBCO

4. HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及滴度檢測所用工具細胞（HEK 293T cat.No.CEH001）

5. Antibiotics：用于穩(wěn)定轉染細胞株篩選，如Puromycin，Neomycin （G-418）等

6. Competent cells：GMco（cat:CCE01）

病毒包裝前的準備

慢病毒表達載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達目的基因或者shRNA的基本元件。吉滿生物提供的慢病毒載體pGMLV系列經(jīng)過精心優(yōu)化，能夠包裝出超高滴度的慢病毒。吉滿生物提供慢病毒載體構建服務，詳情請見公司www.genomeditech。。ｃｏｍ。另外載體擴增盡量選擇吉滿提供的感受態(tài)（cat:CCE01），避免質粒重組。

DNA溶液的制備：以QIAGEN公司的質粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統(tǒng)中各種質粒DNA，質粒DNA溶于除菌的TE或ddH₂O中，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證所提質粒DNA 的 A260/A280在1.8～2.0之間。

細胞狀態(tài)：良好的細胞狀態(tài)對病毒的包裝至關重要，避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，傳兩代之后再包裝。吉滿提供低代數(shù)病毒包裝細胞株293T（cat.No.CEH001）。

慢病毒包裝

吉滿生物慢病毒載體表達系統(tǒng)由pGMLV慢病毒載體和GM easy^TM Lentiviral Mix質粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件 5’LTR和 3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。吉滿可以根據(jù)不同的實驗目的針對pGMLV載體改造以進行啟動子活性研究、基因表達研究、RNA干擾等研究。GM easy^TM Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結構蛋白； pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調(diào)節(jié) gag和 pol基因表達的調(diào)節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的 VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒。

實驗流程

制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質粒及其輔助包裝原件載體質粒，重組質粒載體和輔助質粒載體分別進行高純度無內(nèi)毒素抽提，使用HG Transgene^TM Reagent進行共轉染 293T細胞，轉染后8h 更換為*培養(yǎng)基，培養(yǎng)48h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆?？梢詽M足大部分體內(nèi)體外實驗需求。

293T細胞分盤

轉染前一天，將已經(jīng)長好的細胞以合適比例傳代到10cm培養(yǎng)皿中，當細胞長到~80%時準備轉染。

轉染前換液

轉染前1~2 h 將需要轉染的細胞換新鮮的培養(yǎng)基，12ml/10cm皿。注意：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。

轉染

取無菌的1.5ml EP管或15ml離心管，按下列組分配制反應體系：

無血清DMEM	1ml
DNA	10μg
GM easy^TM Lentiviral Mix	10μl（10μg）
HG Transgene^TM Reagent	60μl

混勻后，室溫放置18min~20min后，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中，后置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

換液

轉染18~20h后，小心吸掉細胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，必須經(jīng)處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15ml新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實驗要求換為無血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。

病毒收集

換液48h后，吸取細胞上清液于50ml離心管，4℃，500g離心5min，上清液用0.45μm濾器過濾后轉移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆?？梢灾苯尤z測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。

病毒分裝與保存

將病毒以40~50μl分裝，后保存于-80℃。

其他

詳細慢病毒包裝流程、注意事項及感染信息可以參見吉滿：www.genomeditech。。ｃｏｍ

吉滿對GM easy^TM慢病毒包裝試劑盒用戶提供*咨詢服務。

產(chǎn)品價格：

貨號	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報價/元	*/元
GMLCP-10	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	10個10cm皿	2798	1958
GMLCP-20	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	20個10cm皿	4598	3218
GMLCP-40	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	40個10cm皿	7698	5388

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