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zeocin鹽酸博萊霉素 （細胞培養(yǎng)級）
zeocin鹽酸博萊霉素 （細胞培養(yǎng)級）

所在地：Invitrogen

貨物所在地：上海上海市

更新時間：2024/9/1 21:01:14

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供應簡介
Zeocin可選擇Sh ble 基因表達的細胞。 與現(xiàn)在使用的其他動物細胞標記物無交叉抗性。因此這種抗生素可用來分離對其他篩選劑（如：慶大霉素，潮霉素）有抗性的克隆。Zeocin 是一種屬于爭光霉素家族的糖蛋白抗生素， 在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細菌（包括E. coli ）、真菌（如：酵母菌）、植物細胞、動物細胞。


詳細介紹

 

Zeocin可選擇Sh ble 基因表達的細胞。與現(xiàn)在使用的其他動物細胞標記物無交叉抗性。因此這種抗生素可用來分離對其他篩選劑（如：慶大霉素，潮霉素）有抗性的克隆。Zeocin 是一種屬于爭光霉素家族的糖蛋白抗生素，在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細菌（包括E. coli ）、真菌（如：酵母菌）、植物細胞、動物細胞。
使用:
● 液體Zeocin 可用于細胞培養(yǎng)。
● 用于篩選轉(zhuǎn)化株的Zeocin 濃度根據(jù)PH 值和鹽濃度改變。
● PH 越高，鹽濃度越低Zeocin 活性越大。
● 普通大腸桿菌菌株篩選可在25 µg/ml zeocin 濃度的低鹽LB 瓊脂培養(yǎng)基中進行，PH 調(diào)至7.5 。
● 動物細胞篩選：根據(jù)不同細胞系從100 到 750 µg/ml 。
● 植物細胞篩選：根據(jù)不同的細胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 µg/ml 。
● 酵母篩選：取決于種屬和培養(yǎng)基，S. cerevisiae Sh ble 轉(zhuǎn)化株在50 µg/ml 濃度的YPD 培養(yǎng)基中篩選，PH7.0.
舉例：構建融合Zeocin和GFP雙篩選標記質(zhì)粒pcB-Zeo-GFP。方法質(zhì)粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通過PCR反應、BamHI酶切后連接替換空白質(zhì)粒pCB的篩選基因gpt，通過菌落PCR，酶切圖譜分析及測序分析鑒定重組質(zhì)粒，構建成功后將其與野生型痘苗病毒進行位點特異性同源重組，經(jīng)Zeocin藥物篩選2代后，用流式細胞儀觀察重組痘苗病毒GFP表達。結果經(jīng)菌落PCR，1號、5號和10號菌落中擴增出426bp的目的條帶，與預期的大小**，經(jīng)酶切分析和DNA測序進一步驗證了重組質(zhì)粒pCB-zeo-GFP；該質(zhì)粒與野生型痘苗病毒同源重組，得到了重組的痘苗病毒；Zeocin篩選2代后，病毒上清感染細胞，流式細胞分析7．18％的細胞中有GFP的表達，而陰性對照僅有1．43％；Zeocin藥物篩選5代后，通過激光共聚焦可在80％以上的細胞中觀察帶GFP；提取的重組痘苗基因組DNA也擴增出預期大小目的條帶。結論含Zeocin和GFP雙篩選標記的新型重組痘苗病毒不僅具有可觀察性且具有藥物抗性，非常容易進行篩選鑒定。
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