深入蛋白純化實驗

   固定化金屬親和層析（IMAC）是蛋白純化的常用方法，特別適用于純化多組氨酸（His）標簽融合蛋白。金屬離子通過螯合劑（配體）固定到基質(zhì)上，與多組氨酸標簽相互作用，有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸（NTA）和亞氨基二乙酸（IDA）是商業(yè)化樹脂中經(jīng)常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子，應(yīng)用于蛋白純化實驗?zāi)兀?/span>

首先，我們比較一下NTA和IDA。NTA是4價結(jié)構(gòu)，IDA是3價結(jié)構(gòu)，NTA比IDA多一個羧甲基。結(jié)構(gòu)上的不同，使得NTA比IDA更穩(wěn)定，能得到更高純度的目標蛋白。IDA更小，使得它與基質(zhì)更緊密的結(jié)合，提高了載量，但同時也導(dǎo)致了更多的非目標蛋白的結(jié)合，但IDA相對便宜。

  一些還原劑會影響IDA、NTA的性能。比如DTT會使金屬離子從IMAC 樹脂上剝落，常常會使樹脂的顏色變?yōu)樽厣?；EDTA對配基的影響更大。但實驗顯示，NTA耐受各類化學(xué)試劑的能力明顯優(yōu)于IDA。

總結(jié)起來，選用IMAC純化蛋白前，得先問這幾個問題：

1.蛋白純度、蛋白載量，哪個是你的目標？

2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTT或EDTA？

3.你的預(yù)算是？

   如果你只是想得到高的蛋白產(chǎn)量，對純度的要求稍微低點，IDA結(jié)合的樹脂可能是你正確的選擇。如果想限度的減少非特異性結(jié)合，可以使用Zn2+ 或Co2+結(jié)合樹脂。從各類數(shù)據(jù)來看，NTA結(jié)合樹脂都表現(xiàn)出極大的*性。而Ni-NTA樹脂則相當于His標簽蛋白純化的行業(yè)標準！

  不同的樣本或許純化的條件不盡相同，但以上zui基本的原則不同樣本都是適用的。