您知道大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶elisa試劑盒操作方法嗎？

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息簡介

ACE 是一種膜結(jié)合糖蛋白分子，分子量為150000。含鋅屬二肽羧肽酶能使血管緊張素I(十肽由腎素轉(zhuǎn)化而來)肽鏈C，末端的組氨酸和亮氨酸殘基水解形成具有增壓作用的血管緊張素II(八肽) 后者通過與血管氣管平滑肌作用引起血管支氣管收縮ACE 也具有降血壓作用。并參與緩激肽P 物質(zhì)等多肽性炎性物質(zhì)的滅活A(yù)CE 還能直接作用于腎上腺皮質(zhì)促進醛固酮分泌因此ACE 是腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)以及緩激肽系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因素影響人體多種生理機能ACE分布于全身各組織，zui高為十二指腸胰卵巢主動脈甲狀腺脾腎與肝的含量甚微此外巨噬細胞單核細胞人胎膜胎盤羊水和臍靜脈血也含此酶各組織ACE 主要定位于毛細血管內(nèi)皮細胞由于肺組織具有豐富的血管床且肺毛細血管床內(nèi)皮細胞所含的ACE 位于細胞外(外周血管床內(nèi)皮細胞所含的ACE 位于細胞內(nèi))。促使血管緊張素I 轉(zhuǎn)化為血管緊張素II 的作用強且肺循環(huán)是體內(nèi)*不使血管緊張素II 滅活的血管床肺循環(huán)流出的血液中血管緊張素II 的含量zui高一般認(rèn)為血管內(nèi)皮細胞的ACE 與胞膜密切結(jié)合幾乎不釋放ACE 而巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生的ACE 大部分釋放入血故當(dāng)ACE 升高時應(yīng)考慮為巨噬細胞，單核細胞系統(tǒng)的分泌亢進多數(shù)報道血清ACE 活性無性別年齡吸煙體位時間變化清醒睡眠狀態(tài)不影響ACE 的活性早產(chǎn)兒足月兒新生兒及健康成人的血清ACE 活性無明顯差別但李平生等 Ucer G.報道ACE 活性男大于女Ucer G.(1)等報道血清ACE 活性與吸煙年齡性別有關(guān),與氧分壓呈負(fù)性相關(guān)。

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒操作方法簡介

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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