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促血管生成素1(ANG1)試劑盒*

時間:2017/9/8閱讀:1713
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促血管生成素1(ANG1)試劑盒基本信息

Ang1是一族分泌型的生長 因子,該家族主要由Ang—l、Ang一2、Ang一3和Ang一4 4種因子組成。Ang—l基因定位于8p22,分子量約70 kD,由498個 氨基酸組成,含3個結構域,從N一端100個氨基酸為*結構域,無同源性;第100—280氨基酸為第二結構域呈螺旋狀盤繞,具有分泌型信號肽的典型特征;第280—496氨基酸是第三結構域,其空間排列方式與膠原蛋白家族極為相似,稱為膠原蛋白樣片段L3。

促血管生成素1(ANG1)試劑盒實驗條件選擇

在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

 ?。?) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

 ?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

 ?。?) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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