原位雜交（FISH雙標(biāo)） 返回列表頁

服務(wù)介紹：

原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交(FISH雙標(biāo))可以檢測(cè)兩個(gè)靶基因的共定位情況。

實(shí)驗(yàn)流程：

細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞爬片固定：細(xì)胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.

3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。

4、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。

5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌

6、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。

7、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)　　

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定，4℃低溫保存運(yùn)輸，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn)，固定時(shí)間過長影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運(yùn)輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運(yùn)輸；

4、細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無酶PBS，密封，4℃運(yùn)輸。 

單據(jù)填寫：

1、探針合成：需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào)、所需標(biāo)記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫明檢測(cè)要求。