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 組織樣本中甘油含量檢測試劑盒

 甘油測定

1. 參見下表加樣。待測樣品體積 10µl，多加可能會抑制反應(yīng)。

2. 37oC 或 25oC 反應(yīng) 10 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管 OD 值。

4. 繪制標準曲線并計算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標準管 OD 值為 y 軸，標準品濃度為 x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)?，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2 值-。

5. 以每 mg 蛋白濃度或細胞數(shù)校正甘油含量。見說明書

說明：

1.血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。

2.紅細胞糖酵解時合成磷酸甘油影響測定。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化

氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測定實體組織、細胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)：

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標準品 1 ml

4 oC，儲存 3 月。

所需設(shè)備：酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可

見光分光光度計。佳工作波長 550nm，如無此波

長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細胞裂解

細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解： 消化、離心收集細胞?；蛑苯釉谂囵B(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞，75cm2瓶約1x107細胞。按比例每 1~2 x 106細胞加 0.1ml 裂解液，混勻，靜置 10 分鐘。

動物組織裂解：

切記要預(yù)先將新鮮組織切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產(chǎn)生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織量(約 100mg)。強烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取）。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實驗調(diào)整初始的組織細胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。

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