目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1390B95-8 EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞系
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來源與轉(zhuǎn)化機制
形態(tài)與生長特征
遺傳與功能特性
染色體核型:保留絨猴二倍體核型特征(2n=46),長期傳代后異倍體比例<15%,核型穩(wěn)定性優(yōu)于人類 EBV 轉(zhuǎn)化的 B 細(xì)胞系。
EBV 相關(guān)標(biāo)志物:持續(xù)表達 EBV 潛伏抗原(EBNA1、LMP1)與早期抗原(EA),晚期抗原(VCA)表達率約 30%-40%(免疫熒光檢測),可自發(fā)釋放傳染性 EBV 顆粒(滴度 10?-10? PFU/mL)。
受體表達:高表達 EBV 主要受體 CD21(陽性率>90%)及 B 細(xì)胞表面標(biāo)志物 CD19、CD20,支持 EBV 再次感染與復(fù)制。
EBV 生物學(xué)研究
病毒復(fù)制周期解析:B95-8 可通過丁酸鈉或巴佛洛霉素 A1 誘導(dǎo),使 EBV 從潛伏狀態(tài)進入裂解期,實現(xiàn)病毒全生命周期的體外模擬。例如,通過誘導(dǎo)后不同時間點的轉(zhuǎn)錄組分析,已鑒定出 30 余個新的 EBV 裂解期調(diào)控基因,為理解病毒潛伏 - 裂解轉(zhuǎn)換機制提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。
病毒顆粒制備:作為實驗室 EBV 標(biāo)準(zhǔn)來源,其分泌的病毒顆??捎糜诟腥救?B 淋巴細(xì)胞,建立 EBV 轉(zhuǎn)化的永生化細(xì)胞模型(轉(zhuǎn)化效率約 10??-10?3),用于研究 EBV 與淋巴瘤、鼻咽癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)。
干擾素生產(chǎn)與抗病毒研究
天然干擾素制備:B95-8 在 EBV 刺激下可高表達 Ⅰ 型干擾素(IFN-α/β),經(jīng)誘導(dǎo)后干擾素活性單位可達 10? IU/mL,是早期人用干擾素制劑的重要生產(chǎn)來源。其分泌的干擾素對 EBV、皰疹病毒等具有廣譜抑制作用,為天然抗病du藥物研發(fā)提供參考。
抗病du藥物篩選:基于其 EBV 復(fù)制特性,可構(gòu)建藥物篩選模型。例如,通過檢測抗病du藥物對 EBV DNA 聚合酶的抑制效果,測定藥物 EC??,與臨床療效相關(guān)性達 0.86,為抗 EBV 藥物評估提供可靠平臺。
疫苗研發(fā)與診斷試劑生產(chǎn)
EBV 疫苗候選抗原制備:B95-8 可高效表達 EBV 糖蛋白 gp350(病毒主要包膜蛋白),重組 gp350 純度可達 95% 以上,已用于 EBV 疫苗的臨床前研究,動物實驗顯示其可誘導(dǎo)中和抗體效價達 1:10000 以上。
診斷抗原制備:其表達的 EBV VCA、EA 可作為診斷抗原,用于傳染性單核細(xì)胞增多癥及 EBV 相關(guān)腫瘤的血清學(xué)檢測(如 ELISA 試劑盒),敏感性達 90%,特異性>95%。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:RPMI 1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入營養(yǎng)補充劑增強細(xì)胞活力。
傳代流程:取對數(shù)生長期細(xì)胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免細(xì)胞密度過高導(dǎo)致凋亡(存活率<70%)。
凍存保護:取密度 1×10? cells/mL 的細(xì)胞懸液,加入等量含 20% DMSO 的培養(yǎng)基(終濃度 10% DMSO),分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜,轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
EBV 誘導(dǎo)與收集
裂解期誘導(dǎo):向?qū)?shù)期細(xì)胞中加入 3mM 丁酸鈉,37℃培養(yǎng) 48 小時后更換含 0.1μg/mL 巴佛洛霉素 A1 的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時,EBV 分泌量可提升 5-10 倍。
病毒收集:收集誘導(dǎo)后 72 小時的細(xì)胞上清,3000rpm 離心 30 分鐘去除細(xì)胞碎片,0.45μm 濾膜過濾后,-80℃分裝保存,使用前需通過噬斑實驗測定滴度。
優(yōu)勢:
EBV 分泌穩(wěn)定:是能持續(xù)釋放高滴度傳染性 EBV 的細(xì)胞系之一,為 EBV 研究提供標(biāo)準(zhǔn)化病毒來源。
功能多樣性:既可用于病毒學(xué)基礎(chǔ)研究,又能生產(chǎn)干擾素與診斷抗原,應(yīng)用場景廣泛。
培養(yǎng)簡便:懸浮生長無需貼壁支持,適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng),便于工業(yè)化生產(chǎn)。
局限性:
物種差異:作為絨猴細(xì)胞,其 EBV 復(fù)制調(diào)控機制與人類細(xì)胞存在差異,部分研究結(jié)果需在人源細(xì)胞中驗證。
病毒安全性:分泌的 EBV 具有傳染性,操作需在生物安全二級實驗室進行,避免實驗室感染風(fēng)險。
誘導(dǎo)效率波動:EBV 裂解期誘導(dǎo)效率受細(xì)胞代次影響(傳代>50 次時下降約 40%),需定期篩選高分泌亞克隆。
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