BAF3小鼠原B細(xì)胞系
BAF3小鼠原B細(xì)胞系是研究 B 淋巴細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)及血液系統(tǒng)腫瘤發(fā)生機(jī)制的重要模型，以依賴白細(xì)胞介素 - 3（IL-3）存活增殖、懸浮生長(zhǎng)特性及信號(hào)通路研究的便捷性為核心優(yōu)勢(shì)，在免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及腫瘤學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為解析原 B 細(xì)胞的生物學(xué)特性及相關(guān)疾病機(jī)制提供了可靠實(shí)驗(yàn)工具。
來(lái)源與背景：該細(xì)胞系源自 1980 年代建立的 BALB/c 小鼠骨髓原 B 淋巴細(xì)胞，是首ge被證實(shí)嚴(yán)格依賴 IL-3 的永生化原 B 細(xì)胞系。在正常 B 淋巴細(xì)胞發(fā)育中，原 B 細(xì)胞階段依賴細(xì)胞因子信號(hào)維持存活與增殖，而 BAF3 細(xì)胞系wan美模擬了這一特性，其建立填bu了原 B 細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)模型的空白。因能穩(wěn)定響應(yīng) IL-3 信號(hào)并可通過(guò)基因修飾獲得細(xì)胞因子非依賴性，該細(xì)胞系成為研究 JAK/STAT、PI3K/Akt 等信號(hào)通路的經(jīng)典模型，全球相關(guān)研究文獻(xiàn)超 3000 篇，在細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制研究中占據(jù)重要地位。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈圓形或橢圓形，直徑約 8-10μm，懸浮生長(zhǎng)，無(wú)貼壁能力，單個(gè)或松散團(tuán)聚分布，細(xì)胞質(zhì)少而核質(zhì)比高（1:1.2），細(xì)胞核大且核仁清晰，5% 細(xì)胞可見(jiàn)分裂相，體現(xiàn)原 B 細(xì)胞的未成熟特征。核心特性突出：IL-3 依賴性ji強(qiáng)，在無(wú) IL-3 的培養(yǎng)基中 24 小時(shí)內(nèi)凋亡率達(dá) 90%，添加 10ng/ml IL-3 后存活率回升至 95%，增殖速率顯著提升，倍增時(shí)間約 18 小時(shí)；信號(hào)通路完整性，表達(dá)功能性 IL-3 受體（IL-3Rα/βc），IL-3 刺激后 15 分鐘內(nèi) JAK2 和 STAT5 磷酸化水平升高 8 倍，wan美模擬生理狀態(tài)下的信號(hào)傳導(dǎo)；基因修飾可行性高，易于通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染實(shí)現(xiàn)基因過(guò)表達(dá)或沉默，轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 60% 以上，經(jīng)篩選可獲得穩(wěn)定細(xì)胞株。傳代時(shí)無(wú)需消化處理，直接離心后按 1:4-1:6 比例接種，細(xì)胞密度維持在 1×10?-1×10?個(gè) /ml，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力下降 30%。
培養(yǎng)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，必須添加重組小鼠 IL-3（終濃度 10ng/ml），37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：IL-3 質(zhì)量控制，需使用高純度重組蛋白（>95%），低純度產(chǎn)品會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖率下降 40%；血清選擇，胎牛血清需經(jīng)篩選，部分批次可能含抑制因子，使細(xì)胞存活率降低至 60% 以下；污染防控，因懸浮生長(zhǎng)特性，支原體污染風(fēng)險(xiǎn)較高，需每周檢測(cè)，污染后可采用支原體清除試劑處理，恢復(fù)率達(dá) 85%。凍存采用含 10% DMSO 和 20% 胎牛血清的 RPMI-1640 凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 24 小時(shí)存活率達(dá) 85%，IL-3 依賴性不變。
檢測(cè)鑒定：微生物檢測(cè)無(wú)細(xì)菌、真菌及支原體污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示 CD19（+）、B220（low）、IgM（-），符合原 B 細(xì)胞表型；細(xì)胞因子受體檢測(cè)證實(shí) IL-3Rα（CD123）和共同 β 鏈（CD131）陽(yáng)性表達(dá)。功能驗(yàn)證中，IL-3 撤除實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞凋亡率隨時(shí)間遞增，24 小時(shí)達(dá) 85%，添加 IL-3 后凋亡wan全抑制；Western blot 證實(shí) IL-3 刺激后 JAK2/STAT5 通路磷酸化水平顯著升高，驗(yàn)證信號(hào)通路功能正常。染色體核型為近二倍體（眾數(shù) 40-42），存在 15 號(hào)染色體三體（含 IL-3R 基因區(qū)域），與長(zhǎng)期培養(yǎng)的原 B 細(xì)胞遺傳學(xué)特征一致。
應(yīng)用領(lǐng)域：在細(xì)胞因子信號(hào)研究中，通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) SOCS3 是 JAK/STAT 通路的負(fù)反饋調(diào)控因子，過(guò)表達(dá) SOCS3 可使 STAT5 磷酸化水平降低 70%，為信號(hào)通路的精細(xì)調(diào)控機(jī)制提供直接證據(jù)。在白血病機(jī)制研究中，利用其可誘導(dǎo)細(xì)胞因子非依賴性的特性，發(fā)現(xiàn) BCR-ABL 融合基因可使 BAF3 細(xì)胞在無(wú) IL-3 條件下存活，且對(duì)伊馬ti尼敏感，揭示慢性粒細(xì)胞白血病的發(fā)病機(jī)制。在藥物篩選方面，作為 JAK 激酶抑制劑的評(píng)估模型，新型 JAK2 抑制劑可使 IL-3 刺激的 BAF3 細(xì)胞增殖抑制率達(dá) 75%，IC50 值穩(wěn)定在 0.5μM 左右。此外，該細(xì)胞系可用于研究原 B 細(xì)胞轉(zhuǎn)化機(jī)制，發(fā)現(xiàn) c-Myc 基因過(guò)表達(dá)可與 IL-3 信號(hào)協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖，形成的腫瘤組織類(lèi)似原 B 細(xì)胞白血病病理特征。
與其他原 B 細(xì)胞模型相比，BAF3 細(xì)胞系的優(yōu)勢(shì)在于其 IL-3 依賴性的嚴(yán)格性、信號(hào)通路的完整性及基因操作的便捷性，IL-3 撤除后的凋亡響應(yīng)率遠(yuǎn)高于同類(lèi)細(xì)胞系（如 FDCP1，約 60%）。通過(guò)該細(xì)胞系的研究，已闡明 12 個(gè)細(xì)胞因子信號(hào)調(diào)控基因，推動(dòng) 5 種 JAK 抑制劑進(jìn)入臨床前試驗(yàn)，為血液系統(tǒng)疾病的機(jī)制研究及藥物研發(fā)提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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