TPA 1-70小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系
TPA 1-70小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系是特異性抗體制備與相關抗原檢測領域的重要細胞模型，憑借穩(wěn)定的抗體分泌能力、優(yōu)異的抗原識別特異性及良好的體外培養(yǎng)性能，在特定疾病分子檢測、免疫診斷試劑研發(fā)及相關免疫學研究中應用廣泛，為獲取高質量單克隆抗體及功能探索提供了可靠載體。
來源與背景：該細胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合產物，通過經典雜交瘤技術篩選克隆獲得。其建立過程是將經特定抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細胞與永生化骨髓瘤細胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細胞，再經有限稀釋法克隆和抗體特異性檢測，最終得到能穩(wěn)定分泌針對目標抗原的單克隆抗體的細胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體特異性不足、成分復雜的問題，為獲得均一性高、靶向性強的抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在相關疾病免疫檢測方法的構建中發(fā)揮了重要作用。
細胞特性：形態(tài)呈現(xiàn)典型雜交瘤細胞特征，貼壁生長時為上皮樣多邊形，細胞質含與抗原識別相關的顆粒，細胞核大而圓，核質比約 1:2.5，約 5% 的細胞可見雙核結構。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達 6-12μg/10?細胞 / 24h，連續(xù)傳代 56 次后，抗體分泌能力僅下降 8%；抗原結合特異性高，與靶抗原的結合常數(shù)（Kd）達 10??M 級別，與同源抗原交叉反應率低于 0.8%；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時間約 53-59 小時，克隆形成率 37%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，14-20 天形成腹水，腹水中抗體濃度達 2-5mg/ml。傳代采用常規(guī)方法，傳代比例 1:3-1:4，細胞密度達 70%-75% 時及時傳代，過度密集會使抗體分泌量下降 17% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素及 0.2% 特定抗原相關組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關鍵要點：血清質量關鍵，需用低內毒素胎牛血清（<0.3EU/ml），劣質血清會使細胞活力降低 25%，抗體分泌量減少 31%；添加物作用顯著，特定組織提取液可維持抗體靶向性，缺失會導致抗體與靶抗原結合率下降 21%；無血清培養(yǎng)適配性較好，添加適量胰島素、轉鐵蛋白及相關生長因子可維持細胞生長，抗體純度達 91% 以上；腹水制備規(guī)范，小鼠腹腔預先注射降植烷，7 天后接種 1.0×10?個細胞，15-21 天收集腹水，每只收獲 1-4ml，純化后仍保持對靶抗原的高親和力。凍存用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時貼壁率達 76%，抗體分泌功能恢復 81% 以上。
檢測鑒定：經嚴格微生物檢測，無細菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細胞質量標準。抗體亞型為 IgG1 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫印跡等驗證，能特異性結合靶抗原，交叉反應率低；染色體核型分析顯示，染色體數(shù)目 81-91 條，融合親本細胞染色體特征；功能驗證中，用于相關組織切片免疫染色時，陽性信號清晰，背景干擾低，證實其實用性。
應用領域：在相關疾病分子檢測中，基于其抗體構建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 0.55ng/ml，適用于多種樣本中靶抗原的定量分析；在診斷試劑研發(fā)中，開發(fā)的免疫熒光探針用于病理切片檢測，診斷符合率達 88%。在免疫學研究中，可用于抗原表位分析，為疫苗設計提供信息。此外，該細胞系可優(yōu)化抗體生產工藝，提升產量 1.1-1.7 倍，降低規(guī)?；a成本，為相關疾病精準診斷及研究提供支持。
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