RNSK/HL-010|大鼠正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞系
RNSK/HL-010|大鼠正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞系作為源自大鼠表皮基底層的正常角質(zhì)形成細(xì)胞模型，因保留皮膚角質(zhì)細(xì)胞的增殖分化特性及屏障構(gòu)建功能，在皮膚屏障功能、創(chuàng)傷修復(fù)機(jī)制及皮膚病病理研究中具有重要價(jià)值，成為探究皮膚表皮生理功能及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠背部皮膚表皮組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈多邊形，部分呈梭形，胞體大小均勻（直徑約 14-18μm），胞質(zhì)呈嗜酸性，可見角質(zhì)顆粒，約 15% 細(xì)胞呈現(xiàn)扁平狀分化特征，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁小而清晰。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈單層魚鱗狀排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 92%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 65 小時(shí)，連續(xù)傳代 14 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 10（CK10）陽(yáng)性率達(dá) 95%，角質(zhì)細(xì)胞分化標(biāo)志物 involucrin 陽(yáng)性率 88%，整合素 β1 陽(yáng)性率 93%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無(wú)染色體畸變；可合成角質(zhì)形成細(xì)胞特異性蛋白絲聚蛋白，基礎(chǔ)表達(dá)量達(dá) 40ng/mL，在鈣濃度升高時(shí)表達(dá)量增加 2.8 倍；能形成多層上皮結(jié)構(gòu)，分化 3 周后可出現(xiàn)明顯的角質(zhì)層；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 96%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在皮膚屏障功能研究中，RNSK/HL-010 細(xì)胞經(jīng)十二烷基硫酸鈉（SDS）處理 24 小時(shí)后，絲聚蛋白表達(dá)量下降 45%，跨上皮電阻值降低 50%，經(jīng)皮水分流失率增加 60%，可模擬化學(xué)刺激導(dǎo)致的皮膚屏障損傷過(guò)程，為解析皮膚屏障破壞機(jī)制提供理想模型。
在創(chuàng)傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞經(jīng)血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）處理 48 小時(shí)后，遷移速率增加 55%，增殖活性提升 48%，基質(zhì)金屬蛋白酶 - 2（MMP-2）活性增強(qiáng) 3.2 倍，可模擬皮膚創(chuàng)傷后的角質(zhì)細(xì)胞遷移修復(fù)過(guò)程，適用于探究創(chuàng)傷愈合機(jī)制及評(píng)估促修復(fù)藥物療效。
皮膚病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）處理后，炎癥因子 IL-6 分泌量增加 4.3 倍，趨化因子 CXCL8 表達(dá)量提升 3.8 倍，角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡率增加 30%，能很好地模擬銀屑病中角質(zhì)細(xì)胞的異?；罨癄顟B(tài)，為篩選皮膚病治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，成纖維細(xì)胞的 Ⅰ 型膠原蛋白分泌量增加 2.5 倍，可用于探究表皮 - 真皮相互作用在皮膚穩(wěn)態(tài)維持中的調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 Keratinocyte Growth Medium 2 培養(yǎng)基，添加 0.1ng/mL 表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、0.4mM 氯化鈣及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，以維持細(xì)胞的增殖分化平衡。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:3-1:4，每 5-6 天傳代一次，避免過(guò)度傳代導(dǎo)致分化能力下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 85% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長(zhǎng)和分化功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物且排列整齊后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁調(diào)整培養(yǎng)環(huán)境鈣濃度，以防影響細(xì)胞分化狀態(tài)。
RNSK/HL-010 大鼠正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞系以其穩(wěn)定的增殖分化特性、完整的皮膚屏障構(gòu)建能力及典型的表皮細(xì)胞功能，在皮膚生物學(xué)研究與皮膚病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示皮膚疾病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新型治療藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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