NRK-52E大鼠腎上皮細(xì)胞系
NRK-52E大鼠腎上皮細(xì)胞系作為源自大鼠腎臟近曲小管的上皮細(xì)胞模型，因保留腎臟近曲小管的重吸收功能及代謝特性，在腎臟損傷修復(fù)機(jī)制、腎小管功能調(diào)控及腎臟疾病病理研究中具有重要價(jià)值，成為探究腎臟近曲小管生理功能及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來源背景：該細(xì)胞系源自大鼠腎臟近曲小管組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多為立方形或多邊形，胞體大小均勻（直徑約 16-20μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜酸性，可見較多的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核呈圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰。生長方式為貼壁生長，呈單層鋪路石樣排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 93%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常腎上皮細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 58 小時(shí)，連續(xù)傳代 20 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 18（CK18）陽性率達(dá) 96%，近曲小管標(biāo)志物 γ- 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）陽性率 94%，上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM）陽性率 92%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無染色體畸變；能主動(dòng)吸收葡萄糖和氨基酸，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率達(dá) 30nmol/(h?mg 蛋白)，氨的生成量達(dá) 25μmol/(h?10?細(xì)胞)；可分泌腎素，基礎(chǔ)分泌量達(dá) 18ng/mL，在血管緊張素 Ⅱ 刺激下分泌量增加 2.3 倍；無微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在腎臟損傷修復(fù)研究中，NRK-52E 細(xì)胞經(jīng)過氧化氫（H?O?）處理 24 小時(shí)后，凋亡率增加 40%，炎癥因子 IL-1β 分泌量提升 4.5 倍，細(xì)胞遷移速率下降 35%；經(jīng)表皮生長因子（EGF）處理后，增殖活性提升 50%，遷移速率增加 60%，可模擬腎臟氧化損傷及修復(fù)過程，為解析腎臟損傷修復(fù)機(jī)制提供理想模型。
在腎小管功能調(diào)控研究方面，該細(xì)胞經(jīng)醛固酮處理 48 小時(shí)后，鈉鉀 ATP 酶活性增強(qiáng) 3.2 倍，鈉離子重吸收量增加 45%，水通道蛋白 1（AQP1）表達(dá)量提升 40%，可模擬醛固酮對(duì)腎小管重吸收功能的調(diào)控過程，適用于探究腎小管水鈉代謝調(diào)節(jié)機(jī)制。
腎臟疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)高糖（30mM）處理后，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白 Ⅰ 型膠原蛋白分泌量增加 2.8 倍，轉(zhuǎn)化生長因子 -β1（TGF-β1）表達(dá)量提升 55%，細(xì)胞出現(xiàn)纖維化樣改變，能很好地模擬糖尿病腎病中腎小管的病變過程，為探究糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，成纖維細(xì)胞的 α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)量增加 3 倍，可用于探究腎小管 - 間質(zhì)相互作用在腎纖維化中的調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 2mM 谷an酰胺、1% 非必需氨基酸及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次，以維持細(xì)胞的正常代謝功能。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:3-1:4，每 4-5 天傳代一次，避免過度傳代導(dǎo)致功能異常。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 4×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 86% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長和功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無異常漂浮物且排列整齊后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁更換培養(yǎng)條件，以防影響其代謝功能。
NRK-52E 大鼠腎上皮細(xì)胞系以其穩(wěn)定的近曲小管特性、完整的重吸收功能及典型的腎臟代謝活性，在腎臟生物學(xué)研究與腎臟疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示腎臟疾病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新型治療藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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