RNEEC/HL-012大鼠正常食管上皮細(xì)胞系
RNEEC/HL-012大鼠正常食管上皮細(xì)胞系作為源自大鼠食管上段黏膜組織的正常上皮細(xì)胞模型，因具備食管上段上皮te有的分化表型及穩(wěn)態(tài)維持能力，在食管黏膜屏障穩(wěn)態(tài)調(diào)控、食管癌多區(qū)域癌變差異及食管上段黏膜損傷修復(fù)研究中具有du特jia值，成為探究食管上段上皮生理功能的重要實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠食管上段黏膜組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和克隆化篩選獲得。細(xì)胞形態(tài)呈多邊形，邊界清晰，較 RNEEC/HL-011 細(xì)胞略?。ㄖ睆郊s 16-20μm），胞質(zhì)呈弱嗜酸性，可見(jiàn)散在的透明角質(zhì)顆粒，細(xì)胞核呈橢圓形，核仁不明顯。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈單層緊密排列，接觸抑制現(xiàn)象顯著，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 90%。核心參數(shù)表現(xiàn)出食管上段上皮特征：倍增時(shí)間約 65 小時(shí)，較 RNEEC/HL-011 長(zhǎng) 5 小時(shí)，連續(xù)傳代 12 次后仍保持穩(wěn)定特性；表面標(biāo)志物表達(dá)具有區(qū)域特異性，細(xì)胞角蛋白 13（CK13）陽(yáng)性率達(dá) 96%，細(xì)胞角蛋白 4（CK4）陽(yáng)性率 94%，EpCAM 陽(yáng)性率 91%，Ki67 基礎(chǔ)陽(yáng)性率低于 5%，顯著低于 RNEEC/HL-011；具有正常二倍體核型（42 條染色體），無(wú)染色體異常；細(xì)胞間連接更為緊密，跨上皮電阻值達(dá) 420Ω?cm2，較 RNEEC/HL-011 高 20%，緊密連接蛋白 claudin-4 表達(dá)量增加 30%；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在食管黏膜穩(wěn)態(tài)研究中，RNEEC/HL-012 細(xì)胞經(jīng)機(jī)械拉伸刺激后，角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）表達(dá)量增加 4.2 倍，絲聚蛋白（Filaggrin）分泌量提升 3.8 倍，較 RNEEC/HL-011 的響應(yīng)更為顯著，可模擬食管上段應(yīng)對(duì)機(jī)械摩擦的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制，為解析食管不同區(qū)域的屏障適應(yīng)差異提供對(duì)比模型。
食管癌區(qū)域差異研究方面，該細(xì)胞經(jīng)亞硝胺處理后，p53 基因突變率為 25%，顯著低于 RNEEC/HL-011 的 38%，但細(xì)胞周期蛋白 D1 表達(dá)量增加 52%，呈現(xiàn)du特的癌變前分子特征，可用于探究食管上段與中段癌變機(jī)制的區(qū)域差異。
在反流性食管炎研究中，該細(xì)胞在酸刺激（pH=4.0）下，跨上皮電阻值下降 28%，顯著低于 RNEEC/HL-011 的 40%，IL-8 分泌量增加 2.3 倍，表現(xiàn)出更強(qiáng)的酸耐受能力，適用于評(píng)估食管上段黏膜保護(hù)藥物的特異性療效。此外，該細(xì)胞與迷走神經(jīng)節(jié)細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，神經(jīng)肽 Y（NPY）分泌量增加 3.1 倍，可用于探究神經(jīng) - 上皮交互作用在食管上段功能調(diào)節(jié)中的作用。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 Keratinocyte-SFM 培養(yǎng)基，添加 0.08ng/mL EGF（濃度低于 RNEEC/HL-011）及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基每 3 天更換一次，以維持其緩慢增殖特性。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 10-12 分鐘（較 RNEEC/HL-011 延長(zhǎng) 2 分鐘），輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例 1:2，每 6-7 天傳代一次，避免頻繁傳代導(dǎo)致分化異常。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 1.5×10?個(gè) /ml（低于 RNEEC/HL-011），經(jīng)程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇存活率達(dá) 83% 以上，3 代內(nèi)恢復(fù)正常功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后靜置 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作需符合生物安全規(guī)范。
RNEEC/HL-012 大鼠正常食管上皮細(xì)胞系以其du特的食管上段上皮表型、更強(qiáng)的屏障穩(wěn)定性及區(qū)域特異性響應(yīng)特征，在食管區(qū)域功能差異研究中具有不可替代的價(jià)值，為系統(tǒng)解析食管上皮的區(qū)域特異性功能及相關(guān)疾病的區(qū)域差異機(jī)制提供了可靠模型。
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