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細(xì)胞

原代細(xì)胞

細(xì)胞系

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SW480 [SW 480；SW-480]人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系，SW480 源自人結(jié)直腸腺癌原發(fā)灶，上皮樣貼壁生長(zhǎng)，KRAS 突變，增殖穩(wěn)定，侵襲力中等，是結(jié)直腸癌早期機(jī)制及藥物敏感性研究的常用模型。

詳細(xì)介紹

SW480 [SW 480；SW-480]人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系

SW480 [SW 480；SW-480]人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系是研究結(jié)直腸癌早期進(jìn)展的重要模型，以 KRAS 突變、微衛(wèi)星穩(wěn)定及典型的原發(fā)灶生物學(xué)特性為核心特征，在結(jié)直腸癌發(fā)生機(jī)制、腫瘤微環(huán)境互作及藥物敏感性研究中應(yīng)用廣泛，為解析結(jié)直腸癌從腺瘤到腺癌的演進(jìn)過(guò)程提供了可靠實(shí)驗(yàn)載體。

來(lái)源與背景：該細(xì)胞系于 1978 年從 51 歲男性患者的結(jié)直腸腺癌原發(fā)灶分離建立，屬于微衛(wèi)星穩(wěn)定型結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系。與轉(zhuǎn)移灶來(lái)源的細(xì)胞系（如 SW620，源自同一患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶）相比，其更能反映結(jié)直腸癌原發(fā)灶的早期生物學(xué)特性，尤其適合研究腫瘤發(fā)生的早期分子事件。作為首ge同時(shí)建立原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶配對(duì)細(xì)胞系的模型，SW480 與 SW620 的對(duì)比研究，為解析結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了du特視角，至今仍是結(jié)直腸癌進(jìn)展研究的經(jīng)典參照。

細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的上皮樣特征，貼壁生長(zhǎng)且排列呈片狀，細(xì)胞呈多邊形，邊界清晰，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，核質(zhì)比約 1:1.4，具有原發(fā)結(jié)直腸腺癌細(xì)胞的典型形態(tài)。核心特性體現(xiàn)為KRAS 突變，攜帶 KRAS G12V 熱點(diǎn)突變，導(dǎo)致 MAPK 通路持續(xù)激活，該突變與約 35% 的結(jié)直腸癌患者一致，使其成為研究 KRAS 驅(qū)動(dòng)型結(jié)直腸癌的理想模型；微衛(wèi)星穩(wěn)定，與約 85% 的結(jié)直腸癌患者基因組特征相符，不同于 HCT 116 的微衛(wèi)星不穩(wěn)定特性，更適合研究染色體不穩(wěn)定性驅(qū)動(dòng)的腫瘤進(jìn)展；增殖與侵襲能力，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 40-48 小時(shí)，克隆形成率約 45%，裸鼠皮下接種成瘤率 100%，Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿透基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)低于 COLO 205，但顯著高于正常結(jié)腸上皮細(xì)胞，且明顯低于同患者的 SW620 細(xì)胞，體現(xiàn)了原發(fā)灶向轉(zhuǎn)移灶演進(jìn)中的侵襲能力提升。傳代時(shí)采用常規(guī)消化液處理，因貼壁較牢固，需消化 3-5 分鐘，傳代比例 1:2-1:4，連續(xù)傳代 50 次后仍保持 KRAS 突變及微衛(wèi)星穩(wěn)定特性。

培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 L-15 培養(yǎng)基，添加 1% 抗菌混合液以維持細(xì)胞活性。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、無(wú) CO?的空氣環(huán)境中（因 L-15 培養(yǎng)基無(wú)需 CO?平衡），每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基，細(xì)胞密度維持在 20%-70% 之間，過(guò)度匯合會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變，KRAS 下游信號(hào)通路活性下降 10%-15%。與 HCT 116 相比，其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的 CO?濃度更敏感，在 5% CO?環(huán)境中會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖速率下降 20%，傳代時(shí)消化后需用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)，凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清，復(fù)蘇后存活率可達(dá) 80% 以上，24 小時(shí)貼壁率超過(guò) 90%，細(xì)胞功能恢復(fù)正常。

檢測(cè)鑒定：經(jīng)微生物篩查，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及常見(jiàn)病毒污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示細(xì)胞角蛋白 20（CK20）和癌胚抗原（CEA）均呈陽(yáng)性表達(dá)，CEA 表達(dá)水平為正常結(jié)腸上皮的 5-7 倍，符合結(jié)直腸腺癌細(xì)胞的表型?；驕y(cè)序證實(shí) KRAS G12V 突變，Western blot 顯示磷酸化 ERK 水平顯著升高，而 BRAF、PIK3CA 等基因均為野生型。染色體核型分析呈現(xiàn)亞三倍體核型，存在 8 號(hào)染色體三體、17 號(hào)染色體短臂缺失等異常，與 60% 的微衛(wèi)星穩(wěn)定型結(jié)直腸癌患者遺傳學(xué)改變吻合。

應(yīng)用領(lǐng)域：在機(jī)制研究中，該細(xì)胞系被廣泛用于揭示 KRAS 突變?cè)诮Y(jié)直腸癌發(fā)生中的作用，研究發(fā)現(xiàn) KRAS G12V 通過(guò)激活下游 c-Myc、Cyclin D1 等靶基因促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展，同時(shí)上調(diào) IL-8 等細(xì)胞因子招募腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，為 “基因突變 - 增殖 - 微環(huán)境重塑" 協(xié)同機(jī)制提供了依據(jù)。在藥物敏感性研究中，因其 KRAS 突變特性，對(duì) EGFR 抑制劑（如西妥昔單抗）的敏感性顯著低于 HCT 116，IC50 值約為 20μg/ml，通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)聯(lián)合 MEK 抑制劑可部分恢復(fù)其對(duì) EGFR 抑制劑的敏感性，推動(dòng)了 “EGFR 抑制劑 + MEK 抑制劑" 聯(lián)合方案的臨床探索。在腫瘤進(jìn)展研究中，與 SW620 的配對(duì)使用，揭示了轉(zhuǎn)移過(guò)程中上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)基因（如 Snail、Twist）的上調(diào)，為理解結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)提供了直接證據(jù)。此外，該細(xì)胞系可用于研究結(jié)直腸癌與腸道菌群的互作，發(fā)現(xiàn)特定菌群代謝物可通過(guò)激活 AhR 通路促進(jìn)其增殖，為 “菌群 - 腫瘤" 互作研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

與其他結(jié)直腸癌細(xì)胞系相比，SW480 的優(yōu)勢(shì)在于其典型的 KRAS 突變、微衛(wèi)星穩(wěn)定特性及與轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞系的配對(duì)關(guān)系，能更真實(shí)地模擬大多數(shù)結(jié)直腸癌患者的基因組特征及早期進(jìn)展?fàn)顟B(tài)。通過(guò)對(duì)該細(xì)胞系的研究，為結(jié)直腸癌的早期診斷標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)及 KRAS 突變型腫瘤的治療策略開(kāi)發(fā)提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)，持續(xù)推動(dòng)結(jié)直腸癌基礎(chǔ)與臨床研究的結(jié)合。