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Kromasil 色譜柱的使用與維護

時間：2022/8/27閱讀：1743

Kromasil 色譜柱的使用與維護

色譜柱安裝與平衡

使用經(jīng)過濾并脫氣的流動相( 不含任何緩沖液) *沖洗HPLC 泵和管線，確保系統(tǒng)中沒有氣泡。按照流向標簽( 位于色譜柱上) 指示的方向?qū)⑸V柱一端連接至進樣器，另一端不接檢測器。將泵流速設置為0.1 mL/min( 或系統(tǒng)允許zui低設置) 并在5 分鐘內(nèi)增大至正常流速。

當色譜柱出口處有溶劑自由流出時停止泵送，擦拭出口端并將其連接到檢測器。

以正常流速和約10-30 倍色譜柱體積的流動相來平衡色譜柱。

檢測柱效

強烈建議用戶在收到Kromasil 原裝jin口色譜柱15 天內(nèi)進行柱效檢測，并在整個使用周期內(nèi)，

進行定期的柱效測試，以便隨時監(jiān)測色譜柱的壽命情況。

運行參數(shù)

5 μm 及3.5 μm 色譜柱最大耐受壓力400 Bar，2.5 μm 及1.8 μm 色譜柱最大耐受壓力1000 bar。最高工作溫度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18，C8，C4，Phenyl

色譜柱時，流動相pH 控制在1.5-9.5 之間，這樣有利于延長色譜柱的使用壽命。

流動相的配置

僅使用HPLC 色譜純?nèi)軇⑺?、最高純度的化學品和試劑。

使用前對所有流動相進行過濾和脫氣。

確保溶劑可互溶。

色譜柱的保存

色譜柱使用完畢后，應盡可能地沖洗掉殘留在色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)和沉積物。保存在適合的儲存溶劑中，儲存溶劑可以參考COA 中建議使用溶劑。儲存環(huán)境需保持溫度穩(wěn)定、避光，并注意檢查Peek堵頭，防止松動導致柱內(nèi)溶劑流失。

色譜柱的清洗

柱壓升高，保留時間變化和柱效降低都是色譜柱被污染的表現(xiàn)。

多數(shù)情況下，通過正確的沖洗能夠解決上述問題。我們需要謹記的是越早沖洗或再生越會更容易的解決上述問題。

通常具有較強吸附的雜質(zhì)都集中在色譜柱進口一端，zui簡單的方法是對色譜柱進行反沖。反沖的方法只對填裝緊密的色譜柱有效，柱性能也不會發(fā)生變化。

反沖時，請按照下述的一般步驟，使用特定溶劑對色譜柱進行清洗，并根據(jù)不同廠商的建議進行，以免損壞色譜柱。

反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1,

Phenyl, PhenylHexyl)

未鍵合的硅膠柱(SIL)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 水: 乙腈=95:5

b. 四氫呋喃

c. 乙腈: 水=95:5

d. 不含鹽的流動相

e. 流動相

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 異丙醇

b. 甲醇

c. 乙酸乙酯

d. 流動相

鍵合正相柱(CN, Diol)

用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18,

C18(w), C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 三氯jia烷

b. 異丙醇

c. 二氯甲烷

d. 流動相

a. 使用20 倍柱體積的不含鹽流動相進行清洗

b. 梯度清洗

流動相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流動相B: 0.1%TFA 乙腈: 異丙醇=1 : 2

在30 min 內(nèi)，B 相從25% 升至100% 進行清洗，運行2 個梯度程序。

c. 流動相平衡，切勿將色譜柱保存在TFA 中

反沖時，請將流動相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測器。反沖時，請將流動相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測器。

Kromasil 保護柱

色譜柱一旦污染，沖洗過程將非常耗時，建議使用保護柱減少對色譜柱的污染，

Kromasil 保護柱 :

• 與Kromasil 色譜柱具有相同的填料，*佳保護色譜柱，同時不影響分析結(jié)果。

• 柱芯柱套式設計，成本低。

部分常規(guī)保護柱訂貨信息

貨號	描述
00000HHO	2.1-4.6 mm guard holder
00000KCO	2.1-21.2 mm guard coupler
M05CLNGC	Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
M05CLNSK	Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit
M05CMNGC	Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
M05CMNSK	Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit
M05CSNGC	Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
M05CSNSK	Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit
M05NHNGC	Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
M05NHNSK	Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit
M05PHNGC	Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
M05PHNSK	Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit
S05CNNGC	Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
S05CNNSK	Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit
M05SINGC	Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
M05SINSK	Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit
S05DINGC	Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
S05DINSK	Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit

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