美國Bio-rad關于生物分子純化的一些指南

生物分子純化指南

■抗體純化

★單抗藥物采用 UNOsphere SUPrA 親和介質進行捕獲，UNOsphere 離子交換中間純化，最后用CHT 陶瓷羥基磷灰石進行精純，該生產工藝可直接得到高純度的抗體，并能zui有效的去除宿主蛋白、聚合體、DNA 和內毒素。

★Affi-Gel 和Affi-Prep Protein A 介質上偶聯(lián)的Protein A 可與免疫球蛋白的Fc 鏈結合，能有效純化各種來源的抗體，包括血清，腹水和培養(yǎng)液等。并且與哺乳動物IgG 具有更高的親和性。

★DEAE/CM Affi-Gel 藍膠：雙配基功能親和凝膠，其中共價結合的Cibacron blue F3GA 染料配基可以結合白蛋白、蛋白酶和其他補體蛋白；DEAE 或CM 在不同條件下能有效結合IgG。因此同樣可以一步純化血清和腹水中的IgG，并且洗脫液中無蛋白酶活性，是Protein A 的經濟替代品。

★Macro-Prep High Q 和High S 兩步離子交換策略非常便于IgM 的純化，純度可達95%以上。

■抗原純化

★Affi-Gel Hz 活化載體通過結合抗體分子Fc 鏈的碳水化合物部分，可以實現(xiàn)對IgG 分子的定向耦聯(lián)，這種結合產生更特異的抗原-抗體作用，比其他介質高出100-300%的抗原結合量。

■重組蛋白純化

★Profinity IMAC 介質是一種用于分離帶有 His-Tag 標簽的重組蛋白的金屬螯合介質。Profinity IMAC 以最新的UNOsphere 為基質，IDA 配基螯合金屬Ni，具有高流速，高載量，高分辨率的特點，可一步純化His 標簽的重組蛋白。

★Profinity GST 預裝柱是在UNOsphere 基質偶聯(lián)了谷胱甘肽衍生物，可以與谷胱甘肽轉移酶結合，用于純化帶有GST標簽的重組蛋白。同樣具有高流速，高載量，高分辨率的特點。

★Profinity eXact 融合標簽系統(tǒng)是基于親和標簽純化蛋白質的系統(tǒng)，用以解決在其他親和標簽系統(tǒng)中普遍存在的標簽去除的瓶頸。耦聯(lián)在瓊脂糖基質中的枯草桿菌蛋白酶可以特異性地識別枯草桿菌蛋白酶原的N 端前結構域75 個氨基酸的標簽序列。利用含氟的洗脫緩沖液引發(fā)了枯草桿菌蛋白酶的酶切活性，可以快速而精確的從融合蛋白質中切下融合的標簽，同時釋放出純化的目標蛋白。

★不帶標簽的普通重組蛋白可采用UNOsphere 離子交換介質捕獲，陶瓷羥基磷灰石，氟代磷灰石CFT，Macro-Prep 離子交換或疏水作為中間純化或精純的策略，其中UNOsphere Q/S 具有高流速高載量低反壓的特點，能有效的進行樣品的粗分離；陶瓷羥基磷灰石對樣品中的鹽不敏感，樣品無需脫鹽即可直接上樣，可單獨用磷酸鹽濃度單梯度洗脫，也可以先用氯化鈉濃度梯度洗脫，再用磷酸鹽梯度洗脫的雙梯度洗脫模式，從而達到更高的分辨率。

■包涵體蛋白純化

★包涵體溶于8M 尿素或6M 鹽酸胍中，可直接上樣于高化學穩(wěn)定性的UNOsphere、Macro-Prep 離子交換介質進行純化，也可以用陶瓷羥基磷灰石I 型純化。對于含His 標記的重組包涵體，可用Profinity IMAC 金屬螯合快速捕獲并一步純化，或者進行柱上復性同步純化。

■酶的純化

★UNOsphere 離子交換，Macro-Prep 離子交換和疏水，羥基磷灰石都能有效分離純化各種酶，其中羥基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM 對酶的吸附更加溫和，不影響酶的活性。

★Bio-Rex 70 弱陽離子交換樹脂可提供更高的載量，更溫和的吸附作用，并支持在位再生和清洗。

■硫酸銨沉淀樣品的純化

★沉淀樣品直接上Macro-Prep 甲基或丁基疏水，洗脫組分再上陶瓷羥基磷灰石進行雙梯度洗脫精純，或上離子交換進行精純。

★先以Bio-Gel P-6DG 脫鹽，再上離子交換單梯度洗脫或陶瓷羥基磷灰石雙梯度洗脫。

■寡糖、多糖和多糖肽的純化

★Bio-Gel P-2, P-4, P-6 和P-10 等可以高分辨率純化寡糖和多糖，以聚丙烯酰胺為基質，不會與糖形成多氫鍵非特異性吸附，可獲得最高得率。

★Macro-Prep DEAE/CM/High Q 和High S 離子交換以聚苯乙烯二乙烯為基質，可用于純化多糖和多糖肽，分辨率高，無非特異性吸附。

■去除內毒素

★Macro-Prep 離子交換和陶瓷羥基磷灰石都能有效去除內毒素，是一種高效、經濟的選擇。

★Affi-Prep 多粘菌素親和介質可結合來自許多革蘭氏陰性菌的內毒素，具備很高的去除率，線性流速可達2000cm/hr，70bar的耐受壓力，可在分析級和工業(yè)級等規(guī)模上應用。

■耦聯(lián)活化親和純化

★Profinity 環(huán)氧化物介質可固化含有氨基、硫醇、羥基等基團的親核配基，耦聯(lián)后可有效純化蛋白質，糖類和DNA 等，例如耦聯(lián)Protein A 以純化單抗，耦聯(lián)麥芽糖結合蛋白和鈣調蛋白配基可有效純化重組蛋白。該介質以UNOsphere為基質具有*的物理強度??高流速、低反壓的大孔結構，可以在很高的流速下操作，使得生產效率得以提高。

★Affi-Gel 10 可有效耦聯(lián)pI 6.5-11 的中性或堿性蛋白，Affi-Gel 15 用于耦聯(lián)pI<6.5 的酸性蛋白，蛋白偶聯(lián)量為35mg/ml 凝膠。

★Affi-Gel Hz 活化載體通過結合抗體分子的Fc 段的碳水化合物部分實現(xiàn)對IgG 分子的的定向耦聯(lián)抗體，，這種結合產生更特異的抗原和抗體作用，比其他介質高出100-300%的抗原結合量。

★Affi-Gel 102 碳二亞胺活化親和介質能耦聯(lián)含初端或末端羧基的配體，可以提供經濟靈活的化學選擇。

■核酸和病毒純化

★CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型對超螺旋DNA 和線性DNA，雙鏈DNA 和單鏈DNA 具有ji高的分辨率，也能有效分離純化病毒。

★基因治療用病毒載體（如腺病毒等）用UNOsphere S 和Q 兩步純化可獲得最佳的純度和得率，而且容易規(guī)模放大。

★Chelex 100 分子生物學級樹脂用于緩沖液和離子試劑的超純化，可有效去除DNA 樣品中影響測序和PCR 反應的各種金屬污染物，也可去除各種生物樣品的金屬污染物。

★AG 50W-X8 陽離子交換樹脂可有效去除DNA 樣品中的溴化乙錠和碘化丙錠的污染。

■去除蛋白質樣品中核酸

★CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型在中性pH 下對核酸有效吸附，而對蛋白質吸附較弱，用一定的磷酸鹽濃度梯度可有效去除蛋白樣品中絕大部分核酸。

★UNOsphere S 和Macro-Prep High S 和CM 都能有效結合帶正電的目標蛋白，而讓核酸流穿過從而去除大部分核酸。

★UNOspherer Q 和Macro-Prep High Q 和DEAE 對核酸具有很高的結合能力，在緩沖液的pH 值低于目標蛋白等電點的情況下使目的蛋白流穿，可以高效的去處蛋白質樣品中的核酸。

■樣品的脫鹽

★蛋白質，核酸等生物大分子的脫鹽可采用Bio-Gel P-6DG。

★AG501-X8 可用于水或其他非離子物質的去離子和脫，AG11 A8 混合床樹脂可從蛋白樣品中去除SDS 和游離的熒光染料，并可從氨基酸中去除無機鹽。

■小量和微量蛋白質精純

★UNO Q/S Monolith，采用連續(xù)床技術，高流速，超高分辨率，10 分鐘內分離4 個蛋白質

■中草藥與天然產物活性成分的純化

親水性活性成分

★UNOsphere 或Macro-Prep 陰陽離子交換能有效分離其中的生物酸、生物堿、皂甙等組分。

★Affi-Gel 硼膠對含鄰、順、式羥基的化合物具有高親和力和高載量，可高效分離糖，糖肽，核苷酸，核苷，兒茶酚胺等小分子化合物。

★具有小分子量排阻范圍的凝膠過濾層析Bio-Gel P-2、P-4、P-6 和P-10 等能以分子排阻模式有效分離各種水溶性小分子物質，分辨率ji高。

★AG1、AG2 和AG50 等分析級樹脂可以分離各種小分子有機物，如各種有機酸、磷酸肌醇、氨基酸、小肽、核苷酸等。

親脂性活性成分

★Bio-Beads S-X 介質是中性，多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體，用于親脂性多聚物和有機洗脫溶質的分子量排阻層析，含分子量0-400，0-1000，0-2000 和600-14,000等各種不同排阻范圍，具有ji高的分辨率，兼容幾乎所有的有機溶劑，包括各種芳香族、鹵代烷等溶劑。可用于分離天然產物中親脂性的物質，環(huán)境中的各種污染物如殺蟲劑、滅鼠劑、多環(huán)芳香化合物和不飽和酯類等。

■單糖、寡糖、糖醇和有機酸的分析

★Aminex HPLC 分析柱，由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的 Aminex HPLC 柱，具有良好的高壓及 pH 穩(wěn)定性、高柱效和選擇性。通過離子調節(jié)分配層析技術分離混合物，根據(jù)多種不同的化學特性分離分子，其分離機制包括離子排阻、離子交換、正相和反相分配、分子量排阻和配體交換等多重機制分離。根據(jù)層析的物理和化學性質，可選擇使用一個或者多個分離機制。Aminex 是工業(yè)界和分析實驗室zui普遍使用的用于分析碳水化合物、有機酸、醇、糖醇、有機堿和其它包括肽和核苷酸的有機小分子的分析高效液相色譜柱。