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關(guān)鍵詞:Transwell實驗|實驗技術(shù)服務
簡介:世界*品牌Transwell實驗|實驗技術(shù)服務原裝,質(zhì)量保證,*。
Transwell實驗|實驗技術(shù)服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌: http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>(1).共培養(yǎng)體系:
小于3.0um孔徑條件下,細胞不會遷徙通過,因此,若研究不涉及細胞運動能力,不需要細胞穿過聚碳酸酯膜,則應選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0μm。我們實驗室用的是0.4μm。
將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的影響。
(2).趨化性實驗
可用5.0、8.0、12.0μm膜,上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室,計數(shù)進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。
①細胞B對細胞A的趨化作用:將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用。
②趨化因子對細胞的趨化作用:將細胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。
(3).腫瘤細胞遷移實驗
常用8.0、12.0μm膜,上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。
(4).腫瘤細胞侵襲實驗
常用8.0、12.0μm膜,原理與腫瘤細胞遷移實驗類似。
② 上層培養(yǎng)液:
上層培養(yǎng)液采用無血清培養(yǎng)基,為維持滲透壓,需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 細胞:
值得注意的是,有侵襲能力的細胞才可用于Transwell侵襲實驗。建議實驗前先用酶譜法檢測MMPs的表達,特別是MMP-2的表達。如果不清楚細胞MMPs的表達情況,就盲目進行Transwell侵襲實驗,可能會造成不必要的浪費,一次Transwell侵襲實驗花錢少則數(shù)百,多則數(shù)千,并不是筆小數(shù)目,還是小心為妙。
另外,為了讓實驗結(jié)果更明顯,可先撤血清讓細胞饑餓12-24h,再進行實驗。
④ 基質(zhì)膠:
常用的是人工重構(gòu)基底膜材料Matrigel,主要成分為層黏連蛋白和Ⅳ型膠原,生產(chǎn)廠家有BD、美國Collaborative Rsearch公司等。CaoY戰(zhàn)友的帖這么說的:Matrigel是BD公司生產(chǎn)的,是一種細胞外基質(zhì),4度時是液體,在37度會逐漸凝固成膠狀,不可逆。同樣的東西在sigma叫ECM。zhangyong1036戰(zhàn)友提供的價格:BD公司的matrigel 1500左右。
如果購買的小室是已經(jīng)鋪好基質(zhì)膠的,那么Matrigel就不需要購買了。
⑤ 下層培養(yǎng)液:
下層常用含5%-10% FBS的培養(yǎng)基,具體濃度根據(jù)細胞侵襲力而定,侵襲力弱的細胞可適當提高FBS濃度。下層也可用趨化因子,有戰(zhàn)友將纖維粘連蛋白加入下層培養(yǎng)液作為趨化因子,但個人認為,F(xiàn)BS仍是zui合適的。
⑥ 細胞培養(yǎng)板:
常用于Transwell侵襲實驗的細胞培養(yǎng)板有6孔板、12孔板、24孔板等,以24孔zui常用。細胞培養(yǎng)板沒什么特殊要求,普通的細胞培養(yǎng)板就可以。但要注意,細胞培養(yǎng)板應當與購買的Transwell小室相配套。
⑦ 此外,膜的下室面可涂上纖維粘連蛋白(fibronectin,F(xiàn)N,Sigma有售),這樣做的目的是使穿過膜的細胞更好地附著在膜上,也可用膠原(collagen)或明膠(gelatin)。很多戰(zhàn)友認為這不是必須的,而且我也是不涂的,細胞照樣貼壁很好。如果貼壁不好的話可以試試看。linanping1979戰(zhàn)友認為,如果培養(yǎng)時間很長(>24h),細胞還是會掉到下室里面去,所以有條件的話,還是在膜下層涂上FN。
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