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2021-7-21 閱讀(3457)
c-Kit 是一種 III 型受體酪氨酸激酶 (RTK)，在癌癥發(fā)生中起著至關重要的作用。目前，c-Kit 主要被認為是一種干細胞因子（SCF），它參與人體的重要功能，如生育、體內平衡和黑色素生成；盡管如此，對 c-Kit 的早期研究將其作為致癌基因引入。c-Kit 的失調，包括過度表達和功能獲得突變，已在幾種人類疾病中檢測到。比如斑狀白化病（Piebaldism）、胃腸道間質瘤（GIST），系統性肥大細胞增多癥（Systemic mastocytosis），急性髓性白血?。╝cute myeloid leukemia）等等。
c-Kit是4號染色體長臂區(qū)域 (4q11-4q13) 中的一種原癌基因，編碼 SCF 受體 (CD117)，由五個 IgG 樣細胞外結構域、一個跨膜螺旋和一個自身抑制性近膜 (JM) 結構域和一個細胞質結構激酶域組成。
c-Kit的信號通路
c-kit涉及多種信號通路，主要涉及Ras- Erk Pathway, PI3K/AKT pathway和Src-signaling pathway。雖然每條信號通路通過不同的途徑，對細胞功能的影響也不同，但三種途徑的結果都是抑制細胞凋亡，以不同的方式導致腫瘤發(fā)生，如誘導細胞增殖、生長進程。
圖1. c-Kit相關的信號通路
c-Kit的常見突變
迄今為止發(fā)現了許多Kit突變位點，并且在不同的癌癥類型中有所不同，反映了每個突變對下游信號通路的影響。Kit基因中的一些“熱點"在某些主要域結構中是有規(guī)律的。比如胞內和胞外juxtamembranes，位于外顯子8，9以及外顯子17，其對應于在激酶結構域活化環(huán)，這些突變破壞了c-Kit的自抑制效應。
圖2. 常見的c-Kit的突變
c-Kit的診斷
根據NCCN指南描述：約80%的GISTs在酪氨酸激酶受體編碼基因KIT存在突變，當具有外顯子11突變時，將近90%的患者可從伊馬替尼治療中獲益；外顯子9突變時，近50%的患者可從伊馬替尼治療中獲益。
在AML的指南中，描述大約有20%的CBF（core binding factor） AML 患者存在 KIT 突變，推薦的分子檢測包括c-KIT, FLT3 [ITD and TKD], NPM1, CEBPA (biallelic), IDH1, IDH2, TP53, and other mutations。
標準品
科佰生物作為一家專業(yè)提供分子診斷標準品的公司，提供關于c-kit多種常見突變形式的產品（gDNA、RNA、ctDNA、FFPE等等），涉及多種技術平臺，對整個流程做質控管理，也適合LDT和IVD的開發(fā)驗證。
表1. 常見c-kit突變的分子診斷標準品
部分數據展示 
圖3. c-KIT p. A502_Y503dupwith sanger sequencing
圖4. c-Kit p.V560D with sanger sequencing
圖5. c-Kit p.D816Vwith sanger sequencing
c-Kit突變藥物研發(fā)
自然狀態(tài)下，c-Kit的催化活性是保持自動抑制的，直到配體SCF結合，啟動c-Kit的同源二聚體，c-Kit單體重排，JM結構域解除自動抑制狀態(tài)，A環(huán)從非活性位置切換到激活位置。我們常見的c-kit突變往往是在不需要配體SCF結合的前提下，直接導致c-Kit的二聚化和激活。
伊馬替尼是針對可切除的原發(fā)性 GIST 患者以及那些不可切除或晚期轉移性 GIST患者作為一線治療藥物獲批，這些突變一般是由Exon11引起。但是一線治療誘導獲得性次級突變主要出現在Exon13/14和17中，這些突變會直接活化A環(huán)，進而對包括伊馬替尼在內的許多抑制劑不敏感。
圖6. 常見c-Kit的抑制劑
藥物靶點模型
針對c-Kit及其常見的耐藥位點，科佰生物開發(fā)了多種cell-based kinase assay模型，可以用于TKI的in vitro和in vivo的活性檢測，適合早期的化合物測活篩選，也合適后期的產品放行QC。
表2. 部分常見c-kit突變的藥物靶點模型
部分數據展示
圖7. Anti-proliferation assay of three reference compounds on the c-Kit WT (SCF1 Dependent)/BaF3 Stable Cell Line.
圖8. Anti-proliferation assay of three reference compounds on the c-Kit D816V/BaF3 Stable Cell Line.
圖9. Anti-proliferation assay of three reference compounds on the c-Kit W557_K558del-D816V/BaF3 Stable Cell Line.
