單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱：單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名： Micro Monodehydroascorbate Reductase (MDHAR) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0655            產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣          產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1900
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：單脫氫抗壞血酸還原酶|抗壞血酸還原酶|MDHAR活性檢測(cè)|試劑盒|微量法

簡(jiǎn)要介紹：
MDHAR 催化 MDHA 還原MDHA 生成 AsA；在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD＋，NADH在340nm有特征吸收峰，但NAD＋沒(méi)有。通過(guò)測(cè)定340nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算MDHAR活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào)：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC0655-100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	1900.00元

產(chǎn)品內(nèi)容： 
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 2 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加入 2.5 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四：液體×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 試劑一充分溶解。
產(chǎn)品說(shuō)明： 
MDHAR 催化 MDHA 還原生成 AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。 MDHAR 催化 NADH 還原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+，NADH 在 340 nm 有特征吸收峰，但 是 NAD+沒(méi)有。通過(guò)測(cè)定 340 nm 光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算出 MDHAR 活性。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備： 研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液 槍和雙蒸水

操作步驟: 
一、粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1：5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（mL）為 500-1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn) 細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲超聲破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3s，間隔 7s，總時(shí)間 3min）； 然后 10000rpm，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
二、MDHAR 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
3. 依次在石英比色皿中加入下列試劑
 

 迅速混勻后于 340nm 比色，記錄 30s 和 150s 的吸光值。分別記為 A1、A2，ΔA=A1-A2，得到 △A 測(cè)定、△A 空白。

三、MDHAR 活性計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 
（1）按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測(cè)定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣）÷T =0.804×(△A 測(cè)定-△A 空白)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮重) =[(△A 測(cè)定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.804×(△A 測(cè)定管-△A 空白管) ÷W
 (3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106]÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =0.804×(△A 測(cè)定管-△A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量 ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6220L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反 總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V 樣總： 提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司 蛋白質(zhì)含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；細(xì)胞數(shù)量：萬(wàn)個(gè)。

 b.使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下： 
（1）按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測(cè)定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣）÷T =1.340×(△A 測(cè)定-△A 空白) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮重)=[(△A 測(cè)定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =1.340×(△A 測(cè)定-△A 空白) ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106]÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =1.340×(△A 測(cè)定管-△A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V 樣 總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本 公司蛋白質(zhì)含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；細(xì)胞數(shù)量：萬(wàn)個(gè)。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子:3.404 PMID:30099273

單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測(cè)試劑盒