試 驗 方 法

6.1 一般要求                                                                                                         

6.1.1 試驗條件
“被測生物安全柜置于正常工作條件下”指：生物安全柜工作于說明書所規(guī)定的條件下。
6.1.2 試驗順序
應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)6.3條規(guī)定的順序進(jìn)行試驗。
6.1.3 試驗環(huán)境
生物安全柜的性能試驗應(yīng)在符合下列環(huán)境要求的門口帶正壓緩沖室的實驗室內(nèi)進(jìn)行:
a) 溫度： 15~30 ℃；
b) 相對濕度：不高于70 %；
c) 潔凈度：在自凈狀態(tài)下可以達(dá)到5級。
6.1.4供電電源
6.1.4.1 電源電壓偏差：±3V；
6.1.4.2 電源頻率偏差：±2Hz。                                                                             

6.2 試驗儀器                                                                                                         

6.2.1 試驗儀器應(yīng)定期送具有檢定(檢驗、校準(zhǔn))資格的計量測試機構(gòu)進(jìn)行測試，有效使用周期長不得超過一年。試驗儀器檢定并校正合格后才可投入使用。
6.2.2 生物安全柜的試驗需要以下儀器：
a)氣溶膠發(fā)生器
b) 粒子計數(shù)器(粒徑分辨率由0.3μm或0.1μm起始)；
c) 噴霧效率≥88 %的噴霧器，符合本標(biāo)準(zhǔn)附錄A的要求；
d) 外徑為63mm的兩端閉合的模擬干擾圓筒（簡稱圓筒），長度由生物安全柜的內(nèi)部尺寸決定，材質(zhì)為不銹鋼或鋁；
f) 撞擊采樣器(毛細(xì)管直徑為1.0mm，采樣量為12.5l/min)；
g) 縫隙采樣器（采樣量為30l/min）；
f) Φ90培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基中應(yīng)含有營養(yǎng)瓊脂、大豆瓊脂或其他適合微生物生長的不含抑制劑或添加劑的介質(zhì)；
g) 熱球式風(fēng)速儀或風(fēng)量測試儀，測量精度為±0.01m/s；
h) 微壓計，精度等級不低于1.5級；
i) 干球溫度計，小單位分格為1℃；
j) 聲級計，測量范圍為50~100dB，“A”計權(quán)模式；
k) 照度計，能滿足1000lx以下照度的測量；
l) 振動儀，小靈敏度達(dá)到2.5μm振幅有效值；
m) 接觸電流檢測儀；
n) 微電阻測試儀；
o) 耐壓測試儀，輸出交流有效值1500V，或直流2121V電壓，且持續(xù)時間能在1~60s范圍內(nèi)設(shè)定。                                                                                                                 

6.3 試驗方法                                                                                                         

6.3.1箱體檢漏
卸去被測生物安全柜的部分護(hù)板或裝飾板，暴露箱體，并將生物安全柜箱體形成一個獨立閉合系統(tǒng)。
將箱體加壓500Pa，連續(xù)維持該狀態(tài)。在箱體的焊縫、墊片、貫穿部分及密封處噴涂25g/L肥皂液，以找出泄漏點。
備注：可用中性洗滌劑稀釋10倍當(dāng)肥皂液使用。
6.3.2 過濾器檢漏
6.3.2.1 排風(fēng)過濾器檢漏
排風(fēng)過濾器檢漏在下述方法中任選一種：
a) 只開排風(fēng)機，不開送風(fēng)機，使生物安全柜吸入普通環(huán)境空氣，含塵濃度不低于10000粒/L(≥0.5μm)。用粒子計數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面和邊框縫隙處之上20mm處，做掃描檢漏，掃描移動速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。
b) 通過氣溶膠發(fā)生器在排風(fēng)過濾器的上游，通過有螺紋插塞的貫穿物向被測生物安全柜的遠(yuǎn)離過濾器的靜壓箱內(nèi)導(dǎo)入氣溶膠，并在上游臨近過濾器處測量氣溶膠濃度，測點少為3點，分別為中心1點，距兩邊50mm處各一點。用粒子計數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面之上20mm處，做掃描檢漏，掃描移動速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。
如果檢漏標(biāo)準(zhǔn)是以0.1μm來評價，只適用方法b)。
檢測到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項的規(guī)定。
6.3.2.2 送風(fēng)過濾器檢漏
環(huán)境含塵濃度≥10000粒/L(≥0.5μm)，在送風(fēng)面以下20mm處，作掃描檢漏，掃描移動速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。
檢測到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項的規(guī)定。
6.3.3潔凈度
被測生物安全柜置于正常工作條件下運行30min。
潔凈度的測量邊界距離內(nèi)表面或前窗150mm。
粒子計數(shù)器的采樣口置于工作臺面向上200mm高度位置，測量點按圖1布置。
潔凈度應(yīng)符合表4中第3項的規(guī)定。                                                               

6.3.4人員安全性
6.3.4.1儀器及采樣點布置(圖2)：
a) 把含有55ml枯草芽孢菌懸液（5 ~ 8×108/ml）的噴霧器置于安全柜左右內(nèi)壁的水平中心，其水平噴射軸應(yīng)在工作臺面向上350mm處，且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗內(nèi)側(cè)100mm處并朝向前窗。
b) 圓筒置于安全柜*，且中心軸位于工作臺面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另一端應(yīng)伸出安全柜前窗少150mm。
c) 圓筒周圍設(shè)四個撞擊采樣器，它們的采樣口設(shè)置在安全柜前窗向外63mm處。其中兩個撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔150mm，且與圓筒頂部水平線相切。另兩個撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔50mm，且與圓筒底部水平線在一個水平面上。另設(shè)置兩個撞擊采樣器，其采樣口所在的水平面位于工作臺面向上360mm處，兩個采樣口的豎軸在安全柜前窗向外50mm處，并分別位于安全柜中心線兩邊各150mm處。
d) 設(shè)置兩個縫隙采樣器，其采樣口所在的水平面即為工作面，垂直軸線距安全柜前端外壁面150mm，且距兩邊內(nèi)壁面均為200mm處。
e) 作為陽性對照，一個有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方，且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm，使其對進(jìn)入隔柵的氣流干擾小。                                

6.3.4.2 采樣程序
緩沖室正常運行，自凈系統(tǒng)開啟，直環(huán)境潔凈度達(dá)到5級后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運行30min后開始試驗。
試驗的持續(xù)時間為30min，采樣程序見表5：                                                      

6.3.4.3細(xì)菌培養(yǎng)
采用一個直徑為47mm，孔徑為0.22μm的薄膜濾片過濾所有的撞擊采樣器采樣液體。在無菌狀態(tài)下，卸下濾片并置于有合適介質(zhì)的培養(yǎng)皿中。盛有濾片的培養(yǎng)皿、兩個縫隙采樣器的培養(yǎng)皿和對照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。
對照培養(yǎng)皿應(yīng)是陽性。當(dāng)對照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。
應(yīng)按6.3.4.2和6.3.4.3的程序進(jìn)行三次試驗。
6.3.4.4 對于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計的生物安全柜在下述條件下按6.3.4.2和6.3.4.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗：
a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s；
b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。
6.3.4.5 試驗結(jié)束后對環(huán)境內(nèi)的各個表面進(jìn)行擦拭消毒。
6.3.5 受試樣本安全性
6.3.5.1儀器及采樣點布置(圖3，圖4)：
a) 含有55ml芽孢菌懸液（5 ~ 8×106/ml）的噴霧器置于安全柜的水平中心，其水平噴射軸應(yīng)在工作臺面向上200mm處，且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗外側(cè)100mm處，并朝向前窗。
b) 圓筒置于安全柜*，且中心軸位于工作臺面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另一端應(yīng)伸出安全柜前窗少150mm。
c)在工作臺面上滿布瓊脂培養(yǎng)皿，然后依次打開培養(yǎng)皿蓋子。
d) 作為陽性對照，一個有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方，且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm，使其對進(jìn)入隔柵的氣流干擾小。                                      

6.3.5.2 采樣程序
緩沖室正常運行，自凈系統(tǒng)開啟，直環(huán)境潔凈度達(dá)到5級后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運行30min后開始試驗。
噴霧器運行5分鐘。噴霧器停止5分鐘后，為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。
6.3.5.3細(xì)菌培養(yǎng)
培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。
對照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測應(yīng)是陽性。當(dāng)對照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。
應(yīng)按6.3.5.2和6.3.5.3的程序進(jìn)行三次試驗。
6.3.5.4對于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計的生物安全柜在下述條件下按6.3.5.2和6.3.5.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗：
a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s；
b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。
6.3.5.5 試驗結(jié)束后對環(huán)境內(nèi)各個表面進(jìn)行擦拭消毒。
6.3.6 交叉感染
6.3.6.1儀器及采樣點布置(圖5)：
a) 含有55ml枯草芽孢菌懸液（5 ~ 8×104/ml）的噴霧器，其水平噴射軸位于工作臺面向上76~127mm處，且平行于工作面。噴霧器的背面緊靠左（右）內(nèi)壁的氣流分界面，噴嘴正對右（左）內(nèi)壁。
b) 瓊脂培養(yǎng)皿按以下方法布置：
位于噴霧器噴嘴的下方設(shè)置兩個對照培養(yǎng)皿，距右（左）內(nèi)壁360mm處布置一列培養(yǎng)皿，在緊靠上述培養(yǎng)皿右（左）側(cè)再布置一列到兩列培養(yǎng)皿。                                 

6.3.6.2 采樣程序
緩沖室正常運行，自凈系統(tǒng)開啟，直環(huán)境潔凈度達(dá)到5級后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運行30min后開始試驗。
噴霧器運行5分鐘。噴霧器停止15分鐘后，為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。
6.3.6.3細(xì)菌培養(yǎng)
培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。
對照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測應(yīng)是陽性。當(dāng)對照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。
應(yīng)按6.3.6.2和6.3.6.3的程序進(jìn)行三次試驗。
6.3.6.4對于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計的生物安全柜在下述條件下按6.3.6.2和6.3.6.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗：
a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s；
b) 離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。
6.3.6.5 試驗結(jié)束后對環(huán)境內(nèi)各個表面進(jìn)行擦拭消毒。
6.3.7 送風(fēng)風(fēng)速
在距離內(nèi)側(cè)壁板及前窗100mm圍成的，在工作臺面上方300mm處的平面區(qū)域內(nèi)測量垂直氣流的平均風(fēng)速。
測量點服從行、列均為150m m的網(wǎng)格分布。若去除測量邊界后凈尺寸不等于15的整數(shù)倍，則允許修正測量點距離，但每列少測量3點，每行少測量7點。
送風(fēng)風(fēng)速為各測量點讀數(shù)的算術(shù)平均值。
送風(fēng)風(fēng)速應(yīng)符合表4中第7項的規(guī)定。
6.3.8 工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速
6.3.8.1 對I級和II級生物安全柜進(jìn)行工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速試驗。試驗步驟如下：
a) 對試驗環(huán)境停止送風(fēng)。
b) 測量排風(fēng)口速度
　用套管和排風(fēng)口法蘭連接，套管長度等于排風(fēng)口長邊的2倍。將套管截面均分為約100mm×100mm的方塊，每一塊中心為一個測點，測點總數(shù)不少于6個。在套管中部垂直兩邊正對每一列方塊中心打孔，風(fēng)速儀測桿伸入孔中測量。
c) 求出排風(fēng)量
以套管截面平均風(fēng)速乘以套管截面積即得排風(fēng)量（m3/s）。
d) 測量送風(fēng)面速度　
在送風(fēng)散流板垂直向下150mm，距邊墻50mm圍成的平面區(qū)域內(nèi)測量送風(fēng)風(fēng)速。該平面的測量點服從行、列約為100mm的網(wǎng)格分布。測點總數(shù)不少于6個。
e) 求出送風(fēng)量
以送風(fēng)面平均風(fēng)速乘以送風(fēng)面面積即得送風(fēng)量（m3/s）。
f) 排風(fēng)量（m3/s）與送風(fēng)量（m3/s）的差值即為計算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量（m3/s）。
g) 計算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量（m3/s）與前窗開口面面積（m2）的商，即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速（m/s），該數(shù)值應(yīng)符合表4中第8項的規(guī)定。
6.3.8.2 Ⅲ級生物安全柜手套入口的風(fēng)速測定，試驗步驟如下：
開啟生物安全柜。把風(fēng)速儀放在手套入口的中心處，并記錄測量的風(fēng)速，測量時間少為1分鐘。另一只手套入口的中心處用風(fēng)速儀進(jìn)行重復(fù)測量。
6.3.9 壓差
被測生物安全柜置于正常工作條件下，柜上微壓差計或用規(guī)定微壓差計測出柜內(nèi)外壓差。
6.3.10溫升
被測生物安全柜置于正常工作條件下連續(xù)運行4h。
將一個干球溫度計置于被測生物安全柜前窗開口面中心向外80mm處測量環(huán)境溫度，另一個干球溫度計置于被測生物安全柜工作臺面的幾何中心向上300mm處測量操作區(qū)溫度。
當(dāng)溫度計上的數(shù)值達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，兩個溫度計的差值應(yīng)符合表4中第10項的規(guī)定。
6.3.11 噪聲
對試驗環(huán)境停止送風(fēng)。
聲級計置于“A”計權(quán)模式。
在被測生物安全柜前壁面中心水平向外300mm，高度距地面1100mm處測量。
處理得到的數(shù)值應(yīng)符合表4中第11項的要求。                                                   

6.3.12 照度
在工作臺面上，沿工作臺面內(nèi)壁面水平中心線每隔300mm設(shè)置一個測量點。與邊墻距離＜150mm時，不再設(shè)置。
被測生物安全柜置于正常工作條件下，重復(fù)各測量點檢測。被測生物安全柜照度為各測量點照度的算術(shù)平均值，并應(yīng)符合表4中第12項的要求。
6.3.13 振動幅值
被測生物安全柜置于正常工作條件。
將振動儀的振動傳感器牢固地固定在工作臺面的中心，測量生物安全柜工作時的總振幅。
工作臺面的振動幅值應(yīng)符合表4中第13項的規(guī)定。
6.3.14 工作臺面抗變形
將面積為250mm×250mm、重量為23kg的測試負(fù)載均勻地施加于被測生物安全柜臺面*，在載重條件下測量安全柜臺面前部邊緣中心地面的距離。
負(fù)載及空載條件下安全柜臺面前部邊緣中心地板的變化距離應(yīng)小于5mm。
6.3.15 接觸電流
按GB/T12113 接觸電流和保護(hù)導(dǎo)體電流的測量方法進(jìn)行試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合表4
中第15項的規(guī)定。
6.3.16 接地電阻
被測生物安全柜所有的功能開關(guān)均置于“斷”位，用微電阻測試儀測量電源插頭“地”插銷與可觸及件之間的電阻，電阻值應(yīng)符合表4中第16項的規(guī)定。
6.3.17 耐電壓
被測生物安全柜電源輸入端各極插銷與箱體接地端之間應(yīng)能承受50Hz正弦電壓1500V有效值工頻電壓持續(xù)1min，應(yīng)無擊穿和閃絡(luò)現(xiàn)象。
6.3.18氣流流向
6.3.18.1 工作區(qū)內(nèi)氣流
在Ⅰ級、Ⅱ級生物安全柜的工作區(qū)域離開口處約50mm的整個截面上發(fā)可視性煙霧，觀察煙霧，應(yīng)符合表4中第18項規(guī)定。
6.3.18.2 吸入口氣流
在Ⅱ級生物安全柜外離開口處約100mm的整個截面上發(fā)可視性煙霧，觀察煙霧，應(yīng)符合表4中第18項規(guī)定。