特異性強(qiáng):經(jīng)過精心篩選和優(yōu)化的抗體,對目標(biāo)物具有高度特異性,幾乎不會與其他結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。有效避免了假陽性結(jié)果的出現(xiàn),為檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性提供了堅(jiān)實(shí)保障。
重復(fù)性好:嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝和完善的質(zhì)量控制體系,確保了試劑盒批內(nèi)和批間的良好重復(fù)性。多次重復(fù)檢測同一批次樣本,結(jié)果的變異系數(shù)(CV)被嚴(yán)格控制在極小范圍,實(shí)驗(yàn)人員能夠獲取穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),為科學(xué)研究的可重復(fù)性奠定基礎(chǔ)。
操作簡便:試劑盒配備了齊全的試劑和詳細(xì)易懂的操作說明書,實(shí)驗(yàn)步驟簡潔明了。即使是初次接觸的實(shí)驗(yàn)人員,也能快速上手操作,無需復(fù)雜的儀器設(shè)備和高深的專業(yè)技能,極大地節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和人力成本。
檢測范圍廣:其檢測范圍覆蓋了目標(biāo)物在正常生理以及多種常見病理狀態(tài)下的濃度區(qū)間。既能精準(zhǔn)檢測正常情況下的低水平表達(dá),也能準(zhǔn)確測定在疾病或?qū)嶒?yàn)干預(yù)后可能出現(xiàn)的高水平變化,適用于各類相關(guān)研究場景和臨床診斷需求。
樣本準(zhǔn)備:依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖占线m的樣本,如血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。確保樣本采集過程嚴(yán)格規(guī)范,避免樣本污染、溶血、脂血等情況干擾檢測結(jié)果。若樣本采集后不能立即檢測,需妥善保存于 -20℃或 -80℃冰箱,防止反復(fù)凍融。
試劑準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,待其恢復(fù)至室溫后,按照說明書依次準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)二抗、底物、洗滌液等試劑。標(biāo)準(zhǔn)品需進(jìn)行系列倍比稀釋,用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
加樣:將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和處理后的樣本加入到預(yù)包被有特異性抗體的固相載體中,同時(shí)設(shè)置空白對照和陰性、陽性對照孔。輕輕振蕩使液體充分混合均勻,然后將反應(yīng)體系置于適宜溫度(通常為 37℃)的恒溫孵育箱中孵育一段時(shí)間,促使樣本中的目標(biāo)物與固相抗體充分結(jié)合。
洗滌:孵育結(jié)束后,倒掉反應(yīng)體系中的液體,用洗滌液充分洗滌固相載體,一般需洗滌 5 次左右,以徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),降低非特異性背景信號。每次洗滌后要確保固相載體充分瀝干。
加酶標(biāo)二抗:向固相載體中加入適量的酶標(biāo)二抗,再次輕輕振蕩混勻,放入恒溫孵育箱中孵育,讓酶標(biāo)二抗與已結(jié)合的目標(biāo)物充分結(jié)合。
再次洗滌:重復(fù)洗滌步驟,去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。
顯色 / 檢測信號:向固相載體中加入底物工作液,輕輕振蕩混勻,將反應(yīng)體系置于適宜條件下(如 37℃避光環(huán)境)孵育,此時(shí)酶標(biāo)二抗上的酶會催化底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的信號。若為顏色反應(yīng),顏色會逐漸加深;若為熒光反應(yīng),則需使用熒光檢測儀檢測熒光強(qiáng)度。
終止反應(yīng)(若有必要):當(dāng)信號達(dá)到合適強(qiáng)度或顯色達(dá)到預(yù)期效果時(shí),加入終止液終止反應(yīng),使信號穩(wěn)定下來。立即使用相應(yīng)的檢測儀器在特定波長下測定各孔的信號值,如使用酶標(biāo)儀測定吸光度。
結(jié)果計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的信號值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,依據(jù)樣本的信號值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的目標(biāo)物濃度,并結(jié)合樣本的稀釋倍數(shù)進(jìn)行校正,最終得出樣本中目標(biāo)物的實(shí)際濃度。