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標準品的稀釋原則: 2 瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至 1ml ,蓋好后靜置 10 分鐘以上,然后反復顛倒 / 搓動以助溶解,其濃度為 300 pg/ml ,做系列倍比稀釋后,分別稀釋 300 pg/ml , 150 pg/ml , 75 pg/ml , 37.5 pg/ml , 18.5 pg/ml , 9 pg/ml , 4.5 pg/ml ,樣品稀釋液直接作為標準濃度 0 pg/ml ,臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。 如配制 150 pg/ml 標準品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 300 pg/ml 的上述標準品加入含 0.5ml 樣品稀釋液的 Eppendorf 管中,混勻即可,其余濃度以此類推。 生物素標記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔 100 μ l ),實際配制時應多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 生物素標記抗體加 990 μ l 生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。 辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔 100 μ l ),實際配制時應多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 辣根過氧化物酶標記親和素加 990 μ l 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
人類成纖維細胞(多種種屬)實驗科研認可品牌
二肽基肽酶ⅣELISA試劑盒,本應用試劑盒已完成多中心臨床驗證,并通過國家食藥監(jiān)總局的認證。我司通過建立覆蓋歐美的采購中心,與歐美1000多個品牌建立了正式的代理與合作,涵蓋所有的生物試劑門類,特別是二三線高質(zhì)量品牌產(chǎn)品,具有壓倒性地優(yōu)勢。產(chǎn)品領(lǐng)域:分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳學、免疫學、生物化學、蛋白質(zhì)學、細胞治療、臨床應用等領(lǐng)域。主營產(chǎn)品:流式抗體、ELISA試劑盒、標準品和對照品、生化試劑、抗體和抗原、細胞因子、技術(shù)服務、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
二肽基肽酶ⅣELISA試劑盒試劑盒(多種屬)行業(yè)操作流程如下:(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl?!。?)酶標板置4℃,包被過夜。(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl?!。?)酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。?。?)洗板,同(4)?!。?)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液 100μl。?。?)酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!。?)洗板,同(4)?!。?0)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min?!。?1)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應?!。?2)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。
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編輯:小檀20181008
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